背景及概述^[1][2]

肺炎克雷伯菌是腸桿菌科克雷伯氏菌屬中最為重要的一類(lèi)菌(俗稱(chēng)肺炎桿菌)，其所致疾病占克雷伯氏菌屬感染的95％以上。肺炎克雷伯菌為革蘭陰性桿菌，病變中滲出液粘稠而重，致使葉間隙下墜?？死撞暇鷮?duì)外界抵抗力強(qiáng)，對(duì)多數(shù)抗生素易產(chǎn)生耐藥性。在健康人的呼吸道和腸道正常菌叢中、自然界水和谷物中均能分離到克雷伯氏菌。

耐藥性^[1]

肺炎克雷伯菌是臨床分離及醫(yī)院感染的重要致病菌之一，隨著β-內(nèi)酰胺類(lèi)及氨基 糖苷類(lèi)等廣譜抗菌素的廣泛使用，細(xì)菌易產(chǎn)生超廣譜β-內(nèi)酰胺酶 (ESBLs)和頭孢菌素酶 (AmpC酶)以及氨基糖苷類(lèi)修飾酶(AMEs)，對(duì)常用藥物包括第三代頭孢菌素和氨基糖苷類(lèi)呈現(xiàn)出嚴(yán)重的多重耐藥性。肺炎克雷伯菌引起的醫(yī)院感染率近期逐年增高，且多耐藥性菌株的不斷增加常導(dǎo)致臨床抗菌藥物治療的失敗和病程遷延。肺炎克雷伯菌耐藥機(jī)制主要包括產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶、生物被膜的形成、外膜孔蛋白的缺失?？咕幬镏鲃?dòng)外排等，抗菌藥物耐藥基因水平播散是多藥耐藥菌株臨床加劇的重要原因。

肺炎克雷伯菌分為3個(gè)亞種：肺炎亞種、臭鼻亞種和鼻硬結(jié)亞種。本菌屬為周?chē)h(huán)境及人呼吸道的常居菌群，也是常見(jiàn)的條件致病菌。目前，本菌屬引起的革蘭陰性菌感染日益增多，其中以肺炎克雷伯肺炎最多見(jiàn)。肺炎亞種的菌體呈橢圓形或球桿狀，多成雙排列，菌體外繞以明顯的莢膜，較菌體寬2～3倍。無(wú)芽孢，無(wú)鞭毛，無(wú)動(dòng)力，有菌毛。培養(yǎng)物上菌體長(zhǎng)，呈多形性，有時(shí)可見(jiàn)絲狀物。需氧或兼性厭氧，在普通培養(yǎng)基上能生長(zhǎng)。有O抗原和K抗原，前者為脂多糖類(lèi)，后者為多糖類(lèi)。共有82個(gè)血清型。對(duì)理化因素的抵抗力不強(qiáng)，對(duì)一般消毒劑敏感，56～60℃加熱迅速死亡。

呼吸道來(lái)源的菌株對(duì)青霉素、鏈霉素、氯霉素和四環(huán)素敏感，但易獲耐藥性。臭鼻亞種最早由臭鼻癥患者的鼻腔分離出來(lái)，多見(jiàn)于北歐。多數(shù)菌株可在以銨為惟一氮源，以葡萄糖為惟一碳源的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。鼻硬結(jié)亞種與肺炎亞種基本相似。本菌分解糖類(lèi)產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，抵抗力基本與肺炎亞種同?？死撞鷮俣喔腥局夭±先思坝變?，死亡率較高，也是國(guó)內(nèi)醫(yī)院感染中最多見(jiàn)的病菌之一。肺炎亞種能引起嬰兒嚴(yán)重的腸炎、肺炎、腦膜炎等和成人的醫(yī)源性尿道感染。臭鼻亞種可致臭鼻癥。鼻硬結(jié)亞種可使人鼻咽、喉和其他呼吸道結(jié)構(gòu)發(fā)生慢性肉芽腫，使組織壞死。

菌落特征^[2]

肺炎克雷伯菌在血平板上生長(zhǎng)，形成灰白色，大而黏，光亮且易成黏絲的菌落，如下圖：

在MacConkey培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸形成較大粉紅色黏稠的菌落，如下圖：

檢測(cè)方法^[2]

目前檢測(cè)肺炎克雷伯菌感染的方法主要包括：微生物培養(yǎng)法和生理生化檢測(cè)、組織病理學(xué)觀察、顯微鏡鏡檢以及PCR、實(shí)時(shí)熒光PCR等分子診斷方法。

微生物培養(yǎng)法耗時(shí)且培養(yǎng)條件復(fù)雜，生理生化檢測(cè)結(jié)果的判讀依賴(lài)于操作者的主觀判斷，從而導(dǎo)致結(jié)果重復(fù)性差，易錯(cuò)判；組織病理學(xué)觀察依賴(lài)切片技術(shù)，耗時(shí)；顯微鏡技術(shù)依賴(lài)涂片技術(shù)；分子檢測(cè)如PCR、 實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)需要昂貴的儀器設(shè)備、技術(shù)要求高。肺炎克雷伯菌可以通過(guò)抗原與抗體的特異性結(jié)合，根據(jù)循環(huán)外周血中肺炎克雷伯菌的抗體的數(shù)量，可判斷是否感染肺炎克雷伯 菌，用于肺炎克雷伯菌感染的臨床輔助診斷，可以快速、敏感的檢測(cè)出人體的感染情況。亟需一種更方便有效的專(zhuān)門(mén)針對(duì)肺炎克雷伯菌的檢測(cè)手段。

CN201810091934.9提供一種肺炎克雷伯菌的檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法，以期解決上述現(xiàn)有技術(shù)中存在的至少部分技術(shù)問(wèn)題。為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種肺炎克雷伯菌的檢測(cè)試劑盒，其包括氨基酸序列為SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.6所示的6條多肽，分別為：

SEQ ID NO.1：Glu Glu Gly Ala Glu Ala Ala Ala Gly Ile Val Leu Leu Ala Ala Gln Gly Ser Thr Ala；

SEQ ID NO.2：Gln Glu Leu Gly Gly Ile Arg Glu Ser Glu Ala Val Thr Ala Ser Ala Arg Thr Gly Gly；

SEQ ID NO.3：Thr Met Gly Ala Arg Arg Glu Gly Ile Glu Thr Ala Ala Pro Ala Thr Ala Thr Gly Ala；

SEQ ID NO.4：Glu Ala Met Asp Leu Ala Glu Ala Thr Ile Ala Ser Thr Leu Ser Glu Gly Gly Ala Ala；

SEQ ID NO.5：Gly Leu Thr Ile Val Gly Ala Gly Glu Gly Ser Leu Lys Ala Ala Thr Ala Ile Gly Glu；

SEQ ID NO.6：Glu Gly Asp Thr Ala Ile Ser Ala Thr Gly Leu Glu Ala Ala Met Ser Ala Ile Gly Ala。

本發(fā)明中，氨基酸序列為SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.6所示的6條多肽在試劑盒中作為T(mén)B刺激物，用于檢測(cè)反應(yīng)。本發(fā)明的有益效果為：本發(fā)明提供的包括氨基酸序列為SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.6所示的6條多肽的檢測(cè)試劑盒能夠人工全序列合成，生產(chǎn)方便快捷，穩(wěn)定性和特異性高，且相比傳統(tǒng)方法檢測(cè)的過(guò)程大大簡(jiǎn)化，極大地降低了成本。利用該試劑盒對(duì)分離的體外樣本進(jìn)行檢測(cè)方便快捷，可控性和精確性均非常理想，且試劑盒操作簡(jiǎn)便。

主要參考資料

[1] 呼吸系統(tǒng)病學(xué)詞典

[2] CN201810091934.9 一種肺炎克雷伯菌的檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法