背景^[1-3]

人γ谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(GGT)Elisa試劑盒是將γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶1(gGT1)抗體包被于96孔微孔板中，制成固相載體，向微孔中分別加入標(biāo)準(zhǔn)品或標(biāo)本，其中的γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶1(gGT1)與連接于固相載體上的抗體結(jié)合，然后加入生物素化的γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶1(gGT1)抗體，將未結(jié)合的生物素化抗體洗凈后，加入HRP標(biāo)記的親和素，再次徹底洗滌后加入TMB底物顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶1(gGT1)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測(cè)定吸光度(O.D.值)，計(jì)算樣品濃度。

γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（γ-GT或GGT）是一種肽轉(zhuǎn)移酶，催化r-谷氨酰基的轉(zhuǎn)移，其天然供體是谷胱甘肽（GSH），受體是L-氨基酸。r-GT在人體各器官中的分布按含量多少依次為腎、前列腺、胰肝、盲腸和腦。但腎臟疾病時(shí)，血清中該酶活性增高不明顯，這可能與經(jīng)尿排出有關(guān)。因此，r-GT主要用于肝膽疾病的輔助診斷。原發(fā)性肝癌、胰腺癌和乏特壺腹癌時(shí)，血清r-GT顯著增高。特別在診斷惡性腫瘤患者有否肝轉(zhuǎn)移和肝癌術(shù)后無復(fù)發(fā)時(shí)，其陽性檢出率可高達(dá)90％。酗酒或長期接受某些藥物如巴比妥者，r-GT活性可升高。此外，急、慢性肝炎，慢性肝炎活動(dòng)期、阻塞性黃疸、膽管感染、膽石癥、急性胰腺炎時(shí)，均可增高。

人γ谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(GGT)Elisa試劑盒

人γ谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(GGT)Elisa試劑盒樣本處理及要求：

1.人γ谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(GGT)elisa定量檢測(cè)試劑盒48T/96T血清：全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃過夜后于1000g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

2.血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2-8°C 1000g離心20分鐘，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

3.組織勻漿：用預(yù)冷的PBS(0.01M,pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測(cè)量結(jié)果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對(duì)應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎，或反復(fù)凍融。將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測(cè)。

4. 細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：1000g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

人γ谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(GGT)Elisa試劑盒操作步驟：

1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔，在第一、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl，然后在第一、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后從第一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為72 pg/mL，48 pg/mL，24pg/mL，12 pg/mL，6 pg/mL）。

2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

應(yīng)用^[4][5]

人γ谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(GGT)Elisa試劑盒可以用于血清γ谷氨酰轉(zhuǎn)移酶水平與急性心力衰竭患者預(yù)后的相關(guān)性研究

評(píng)價(jià)血清γ谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(Serum gamma glutamine transferase,GGT)水平與急性心力衰竭(acute heart failure,AHF)患者預(yù)后的相關(guān)性。

方法：選取2012年9月至2013年1月期間于我院心臟中心住院的急性左心室收縮功能衰竭患者188例(男性78例,女性110例)臨床資料進(jìn)行回顧性分析,根據(jù)患者預(yù)后死亡或存活分為死亡組及存活組,其中死亡組36例,男14例,女22例,平均年齡(67.28±11.04)歲,存活組152例,男64例,女88例,平均年齡(63.95±12.42)歲,分析兩組患者的基本臨床資料及院內(nèi)死亡率。

人γ谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(GGT)Elisa試劑盒結(jié)果：兩組間射血分?jǐn)?shù)、心房纖顫、民族、高血壓、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、血尿素氮、血肌酐、肌酸激酶、肌酸激酶同工酶、總膽汁酸、心房腦鈉肽均有顯著差異。死亡組與存活組比較,兩組患者的血清γ谷氨酰轉(zhuǎn)移酶分別為39.24±5.90和31.03±10.22,有顯著差異；兩組間性別、年齡、空腹血糖、脂蛋白(a)、總蛋白、甘油三酯、總膽固醇、尿酸、糖尿病、心力衰竭分級(jí)、藥物應(yīng)用均無明顯差異；根據(jù)血清γ谷氨酰轉(zhuǎn)移酶水平患者也分為兩組,高血清γ谷氨酰轉(zhuǎn)移酶組與低血清γ谷氨酰轉(zhuǎn)移酶組死亡率比例為(15.3%vs4.6%)。Logistic回歸分析顯示血清γ谷氨酰轉(zhuǎn)移酶為急性心力衰竭的危險(xiǎn)因素P<0.05。用ROC曲線對(duì)評(píng)價(jià)血清γ谷氨酰轉(zhuǎn)移酶對(duì)于急性心力衰竭死亡死亡的診斷價(jià)值,敏感度78.9%,特異度66.7%,cutoff值35.5 U/L,曲線下的面積為0.759,95%的置信區(qū)間0.662-0.859,P<0.05。

參考文獻(xiàn)

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