背景及概述^[1][2]

利那洛肽( linaclotide) 是由美國 Ironwood 公司研發(fā)的一種鳥苷酸環(huán)化酶 C(GC-C) 激動劑，于2012 年 8 月 30 日獲美國 FDA 批準(zhǔn)上市，商品名為 Linzess。該藥為膠囊劑，用于治療便秘腸易激綜合征( IBS-C) 和慢性特發(fā)性便秘(CIC)，它是首個具有此種作用機制的治療便秘的藥物。

利那洛肽是一個 14-氨基酸肽，序列為 L-cysteinyl-L-cysteinyl-L-glutamyl-L-tyrosyl-L-cysteinyl-Lcysteinyl-L-asparaginyl-L-prolyl-L-alanyl-L-cysteinylL-threonyl-L-glycyl-L-cysteinyl-L-tyrosine，cyclic (1-6)，(2- 10)，(5- 13) -tris( disulfide)；為白色至灰白色無定形粉末；微溶于水和氯化鈉水溶液( 0. 9% ) 。利那洛肽口服進(jìn)入人體后通過與腸道中的鳥苷酸環(huán)化酶 C 型受體(GC-C)結(jié)合，使細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外環(huán)鳥苷酸(cGMP)濃度升高，刺激腸液分泌，加快胃腸道移行，從而增加排便頻率，由于其獨一無二的作用機制，很有希望成為一種不但可以治療便秘，還可以治療腹脹、腹痛和其它臨床癥狀的治療藥物.。

規(guī)格^[3]

膠囊：145 μg和290 μg。

用法用量^[3]

1）IBS-C：290 μg口服每天1次；2）CIC：145 μg 口服每天1次；3）空胃服用首次餐至少30分前。

應(yīng)用^[3]

適用于在成年中為治療：1）有便秘腸易激綜合征(IBS-C) ；2）慢性特發(fā)性便秘(CIC)。

臨床研究^[1]

在臨床進(jìn)行的隨機、雙盲試驗中，將 IBS-C 患者隨機分為治療組(給予利那洛肽 290 μg/d)和安慰劑組，治療至少 12 周，結(jié)果顯示，與安慰劑組相比，利那洛肽在患者腹痛和增加完全自發(fā)排便次數(shù)(CSBMs) 方面更有效。利那洛肽用于慢性特發(fā)性便秘患者的安全性和有效性，在進(jìn)一步開展的兩項雙盲、多中心臨床試驗中得到了證實，在這兩項研究中，患者被隨機分為安慰劑組、利那洛肽145 μg/d組或利那洛肽 290 μg/d組。

治療 12 周后，劑量為 145 μg/d利那洛肽治療組的患者完全自發(fā)排便次數(shù)明顯高于安慰劑組。而 290 μg/d治療組的臨床效果并沒有太大的提高，故對于慢性特發(fā)性便秘( CIC) 的治療 FDA 只批準(zhǔn)了145 μg/d劑量。該藥的推薦劑量為 290 μg/d (治療 IBS-C) 和 145 μg/d (治療CIC)，于當(dāng)天首餐前至少 30 min 服用。利那洛肽的不良反應(yīng)包括腹瀉、 腹痛和嘔吐。值得注意的是，16 歲及以下的患者。

藥理作用 ^[1]

利那洛肽是一種鳥苷酸環(huán)化酶 C 激動劑，它與腸道 GC-C 結(jié)合后，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外環(huán)鳥苷酸( cGMP) 濃度升高。細(xì)胞內(nèi) cGMP 升高可以刺激腸液分泌，加快胃腸道移行，從而增加排便頻率；細(xì)胞外 cGMP 濃度升高會降低痛覺神經(jīng)的靈敏度、降低腸道疼痛。

藥代動力學(xué)^[3]

吸收：口服給藥后LINZESS吸收少生物利用度低。口服劑量145 μg或290 μg給藥后利那洛肽及其活性代謝物的濃度血漿中低于定量低限。因此，不能計算標(biāo)準(zhǔn)藥代動力學(xué)參數(shù)例如曲線下面積(AUC)，最高濃度(Cmax)，和半衰期(t½)。

分布：鑒于利那洛肽治療的口服劑量的血藥濃度，是無法衡量的，預(yù)計利那洛肽分布至組織很少。

代謝：利那洛肽在胃腸道內(nèi)通過丟失末端酪氨酸部分被代謝為其主要，活性代謝物。利那洛肽及其代謝物在小腸腔內(nèi)被蛋白解降解為較小肽和天然存在氨基酸。

消除：進(jìn)食和空腹受試者每天給予290 μg的LINZESS共7天后在糞樣品中回收活性肽平均約5% (空腹)和約3% (進(jìn)食)和實際上所有為活性代謝物。

不良反應(yīng)^[3]

注意事項^[3]

1. 兒童風(fēng)險在患兒直至6歲LINZESS禁忌。在非臨床研究中，在幼年小鼠中(1至3周齡小鼠；約等于人患兒小于2歲)給予1或2次每天口服劑量利那洛肽后死亡發(fā)生在24小時內(nèi)。在6至17歲患者中避免使用LINZESS.利那洛肽不致死亡在較年長幼小鼠中(約等于人年齡12至17歲)。雖然在較年長幼小鼠中沒有死亡，給予年青幼小鼠死亡和在青少年患者中缺乏臨床安全性和療效數(shù)據(jù)，在6至17歲患者中避免使用LINZESS。

2. 腹瀉：在合并IBS-C和CIC雙盲安慰劑對照試驗中腹瀉是LINZESS-治療患者最常見不良反應(yīng)。LINZESS-治療患者報道的嚴(yán)重腹瀉為2%。I BS-C和CIC人群間腹瀉的發(fā)生率相似。

藥物相互作用^[3]

尚未進(jìn)行藥物-藥物相互作用研究。給予推薦臨床劑量后血漿中不能檢測到利那洛肽及其活性代謝物；因此，預(yù)計無全身藥物-藥物相互作用或通過血漿蛋白結(jié)合利那洛肽或其代謝物介導(dǎo)的藥物相互作用。根據(jù)體外研究結(jié)果利那洛肽與細(xì)胞色素P450酶系統(tǒng)不相互作用。此外，利那洛肽不是外流轉(zhuǎn)運蛋白P糖蛋白(P-gp)的底物也不是其抑制劑。

制備^[4][5][6]

方法1：一種制備利那洛肽的方法，包括以下步驟：

1）Fmoc-Tyr(tBu)-OH與載體樹脂反應(yīng)，得到Fmoc-Tyr(tBu)-樹脂；

2）Fmoc-Tyr(tBu)-樹脂與其他帶有Fmoc保護(hù)基團的氨基酸逐一用活化劑偶聯(lián)，得到利那洛肽線性肽樹脂；

3）利那洛肽樹脂經(jīng)脫保護(hù)、裂解試劑裂解、得到利那洛肽線性肽；

4）利那洛肽線性肽中的三個二硫鍵經(jīng)氨水/DMSO體系環(huán)化后，得到利那洛肽粗肽；

5）利那洛肽粗肽在堿性緩沖溶液中純化后，凍干即得到利那洛肽純品。

方法2：一種合成利那洛肽的方法，包括以下步驟：

步驟1、合成在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列Thr側(cè)鏈上、Cys側(cè)鏈上、Asn側(cè)鏈上、Tyr側(cè)鏈上、Glu側(cè)鏈上偶聯(lián)有保護(hù)基以及在C端偶聯(lián)有樹脂載體的利那洛肽樹脂；

步驟2、利那洛肽樹脂酸解脫除所有保護(hù)基和樹脂載體得到利那洛肽線性粗肽，然 后采用半胱氨酸鹽酸鹽/DMSO緩沖溶液對利那洛肽線性粗肽進(jìn)行環(huán)化，按照其N端到C端的 氨基酸順序，形成第1位Cys和第6位Cys的二硫鍵、第2位Cys和第10位Cys的二硫鍵以及第5 位Cys和第13位Cys的二硫鍵得到利那洛肽粗品，粗品純化轉(zhuǎn)醋酸鹽后即得利那洛肽成品。

方法3：一種利那洛肽的固相合成方法，該方法包括如下步驟：

1)利那洛肽樹脂的制備：Fmoc-Tyr(tBu)-OH和載體樹脂反應(yīng)，獲得Fmoc-Tyr(tBu)- 樹脂；以Fmoc-Tyr(tBu)-樹脂為固相載體，采用逐一偶聯(lián)的方式從C端到N端依次偶聯(lián) 13個具有Fmoc保護(hù)基團的氨基酸，獲得利那洛肽線性肽樹脂，其中，形成二硫鍵的三 組Cys分別連接Trt、Acm或tBu保護(hù)基，同組的Cys連接相同保護(hù)基，不同組的Cys 連接不同的保護(hù)基；

2)將步驟(1)得到的利那洛肽線性肽樹脂進(jìn)行切割，脫去除Cys(Acm)和Cys(tBu) 外的所有氨基酸的側(cè)鏈保護(hù)基，得到了含有Cys(Acm)和Cys(tBu)的保護(hù)基線性肽；

3)氧化步驟(2)得到的線性肽形成對二硫鍵，得到單二硫環(huán)肽；

4)脫除步驟(3)得到的單二硫環(huán)肽中Cys(Acm)中Acm保護(hù)基，同時形成第二對二硫鍵，得到雙二硫環(huán)肽；

5)脫除步驟(4)得到的雙二硫環(huán)肽中Cys(tBu)中的tBu保護(hù)基，同時形成第三對二硫鍵，得到三二硫環(huán)肽；

6)步驟(5)得到的三二硫環(huán)肽經(jīng)HPLC制備純化，凍干得到利那洛肽。

參考資料

[1] 衛(wèi)高菲. 利那洛肽[J]. 中國藥物化學(xué)雜志, 2013 (1): 78-78.

[2] 葛巍巍, 陳靜, 張也, 等. 半選擇性氧化形成三對二硫鍵合成利那洛肽[J]. 有機化學(xué), 2017, 37(9): 2409-2415.

[3] 利那洛肽說明書

[4] CN201610644791.0 一種制備利那洛肽的方法

[5] CN201510314459.3 一種合成利那洛肽的方法 

[6] CN201510391880.4 一種利那洛肽的固相合成方法