背景及概述^[1][2]

多粘菌素是從多粘桿菌培養(yǎng)液中分離出的一種多肽類抗生素。由于不同菌株產(chǎn)生化學(xué)結(jié)構(gòu)不全相同的多粘菌素A、B、C、D、E。臨床應(yīng)用上市的產(chǎn)品主要是多黏菌素B和多黏菌素E (又稱黏菌素，colistin)的硫酸鹽和甲磺酸鹽。多黏菌素B和E的抗菌譜相似，但抗菌活性有所不同。一般多粘菌素B的作用優(yōu)于多粘菌素E。多粘菌素于20世紀(jì)50年代被開發(fā)出來(lái)，20世紀(jì)60年代用于治療革蘭陰性菌感染，特別是銅綠假單胞菌所致感染。

由于其抗菌譜窄，腎毒性較明顯，特別是20世紀(jì)80年代后一些新的廣譜抗菌藥物如第三代頭孢菌素、碳青霉烯類等藥物的出現(xiàn)和在臨床的廣泛使用，導(dǎo)致多黏菌素被棄用。多黏菌素E(黏菌素)(colistin)是一個(gè)由多種組份組成的多肽類抗生素，主要由E₁和E₂組成(或稱為A或B)。在20世紀(jì)50年代，多黏菌素E(黏菌素)就應(yīng)用于臨床，主要用于革蘭氏陰性菌引起的感染，特別是由多重耐藥綠膿桿菌(P.aeruginosa)、鮑氏不動(dòng)桿菌(Acinetobacterbaumannii)等引起感染的治療。

臨床使用的多黏菌素E(黏菌素)有兩種，一種是口服或局部使用的硫酸多黏菌素E(黏菌素)(也稱硫酸黏菌素)，另一種是供注射用的多黏菌素E(黏菌素)甲磺酸鈉(ColistimethateSodium)。這兩種藥物都是多組份藥物，在硫酸多黏菌素E(黏菌素)中，含有包括E₁、E₂、E₃等至少5種組份(參見歐洲藥典5.0)，同樣在多黏菌素E(黏菌素)甲磺酸鈉也至少含有多黏菌素E(黏菌素)₁甲磺酸鈉和多黏菌素E(黏菌素)₂甲磺酸鈉等5種組份。

自上世紀(jì)80年代開始因高發(fā)的腎臟毒性和神經(jīng)毒性，多黏菌素E(黏菌素)(colistin)的應(yīng)用受到限制，并幾乎被臨床棄用。但是近年來(lái)，由于革蘭氏陰性菌耐藥株尤其是多耐藥菌株感染病例的出現(xiàn)以及新藥開發(fā)有限的情況下多黏菌素E(黏菌素)(colistin)再次引起了全球醫(yī)療界的重視。同樣如何提高多黏菌素E(黏菌素)(colistin)的抗菌活性、降低其毒性從而擴(kuò)大臨床適用人群也成為了藥學(xué)研究者所面臨的技術(shù)難點(diǎn)。

制備^[2]

泡沫分離提取多粘菌素E。十二烷基硫酸鈉可以用于多粘菌素E的泡沫分離。實(shí)驗(yàn)確定的操作條件為：pH4～5，氣速220mL/min，SDS濃度0.06g/L，此條件下提取率達(dá)到80%，富集比達(dá)到4.2。微生物實(shí)驗(yàn)證明，SDS不影響多粘菌素E的抗菌活性，因此本方法是可行的。泡沫液中的SDS通過(guò)正丁醇進(jìn)行萃取回收，鹽析劑的存在可大大提高萃取回收率。有機(jī)相/水相為1∶12.5，在0.5mol/LNaCl存在的情況下，SDS脫除率達(dá)到99.4%，實(shí)現(xiàn)了泡沫分離后多粘菌素E的純化。泡沫分離法能夠有效地提取多粘菌素E，克服了離子交換法污染嚴(yán)重等問(wèn)題，因此具有很好的應(yīng)用前景。

藥理作用^[3]

本品主要作用于細(xì)菌細(xì)胞膜，使細(xì)胞內(nèi)的重要物質(zhì)外漏；其次影響核質(zhì)和核糖體的功能，為慢效殺菌劑。大腸埃希菌、克雷伯菌屬、腸桿菌屬對(duì)本品敏感，本品對(duì)銅綠假單胞菌的抗菌活性差異較大。不動(dòng)桿菌屬、沙門菌屬、志賀菌屬、流感嗜血桿菌、百日咳鮑特菌、嗜肺軍團(tuán)菌通常敏感?；魜y弧菌可呈現(xiàn)敏感，但埃爾托型弧菌耐藥。沙雷菌屬、腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、變形桿菌屬、布魯菌屬均耐藥。脆弱擬桿菌耐藥，而其他擬桿菌屬和真桿菌屬則很敏感。所有革蘭陽(yáng)性菌對(duì)本品均耐藥，本品屬窄譜抗生素。

適應(yīng)證^[3]

腸道手術(shù)前準(zhǔn)備或用于大腸桿菌性腸炎和對(duì)其他藥物耐藥的菌痢。

劑量與用法^[3]

口服，成人每日100萬(wàn)～300萬(wàn)單位，分3次服。兒童每次25萬(wàn)～50萬(wàn)單位，每日3～4次。宜空腹給藥。靜脈滴注與肌內(nèi)注射，每日100萬(wàn)～150萬(wàn)單位。

注意事項(xiàng)^[3]

對(duì)本品過(guò)敏者禁用。嚴(yán)重腎功能損害者及孕婦慎用。不宜與其他腎毒性藥物合用。使用本品可能出現(xiàn)惡心、嘔吐等胃腸道反應(yīng)及皮疹、瘙癢等過(guò)敏反應(yīng)。

檢測(cè)方法^[4]

1. HPLC法

反相高效液相色譜法測(cè)定硫酸多粘菌素E脂質(zhì)體的含量及包封率，色譜柱為DiamonsilC8柱(250mm×4.6mm，5μm)，流動(dòng)相均采用0.01mol·L－1三氟乙酸-乙腈系統(tǒng)，流速為1.0mL·min－1，采用的紫外檢測(cè)波長(zhǎng)分別為215nm和205nm。多粘菌素E1在50～300μg·mL－1范圍內(nèi)線性良好。由于多粘菌素E的紫外吸收很弱，且為末端吸收，故對(duì)流動(dòng)相及檢測(cè)器的要求較高，常用的甲醇流動(dòng)相系統(tǒng)無(wú)法用于該物質(zhì)的測(cè)定，并且要求所使用的紫外檢測(cè)器靈敏度要比較高，否則難以得到良好的響應(yīng)。

使用具蒸發(fā)光散射檢測(cè)器同時(shí)測(cè)定配方中妥布霉素和硫酸多粘菌素E的含量。色譜柱是ZorbaxSBC18柱(150mm×4mm，3.5μm)，采用乙腈-三氟乙酸流動(dòng)相系統(tǒng)進(jìn)行梯度洗脫。重復(fù)性測(cè)定結(jié)果表明相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差低于3.0%，線性范圍在0.16～0.24mg·mL－1。該法具有良好的專屬性、準(zhǔn)確度、精密度和線性。在藥物分析中，對(duì)于沒(méi)有發(fā)色基團(tuán)的藥物成分的測(cè)定，蒸發(fā)光散射檢測(cè)器是一個(gè)比較好的選擇。

2. LC-MS/MS法

固相萃取預(yù)處理技術(shù)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道表明，LCMS/MS法很好地應(yīng)用于檢測(cè)培養(yǎng)液、牛奶、血液、尿液及其他生物樣品中的多粘菌素E。在樣品處理中，均采用了固相萃取(SPE)技術(shù)對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行預(yù)處理，采用電噴霧離子源(ESI)，正離子檢測(cè)方式。多粘菌素E主要成分多粘菌素E1，E2在培養(yǎng)液中的線性范圍為0.48μg·mL－1～9.60μg·mL－1；在人血漿中為0.028μg·mL－1～1.78μg·mL－1，0.016μg·mL－1～1.01μg·mL－1。

培養(yǎng)液中的多粘菌素E的定量下限為0.48μg·mL－1；牛奶中多粘菌素E1的定量限為50μg·kg－1；而人血漿中硫酸多粘菌素E1的定量下限為0.028μg·mL－1，硫酸多粘菌素E2則可低至0.016μg·mL－1。固相萃取技術(shù)用于除去待測(cè)樣品中的內(nèi)源性雜質(zhì)，提取多粘菌素E1和E2，不需要經(jīng)過(guò)衍生化，使樣品的前處理簡(jiǎn)單快速，所需樣品體積少，處理干凈，分析時(shí)間短，能有效保護(hù)質(zhì)譜儀，對(duì)于多粘菌E素臨床前及人體藥代動(dòng)力學(xué)的研究及食品中的殘留是比較理想的。

3. UPLC-MS/MS法

超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(UPLC-MS/MS)法分析動(dòng)物源性食品中及水產(chǎn)品中殘留的多粘菌素E。多粘菌素E1，E2的線性范圍是200ng·mL－1～2000ng·mL－1，檢出限分別為10.0μg·kg－1和15μg·kg－1，定量下限為40.0μg·kg－1和50μg·kg－1。與液相色譜法、超高效液相色譜法相比較，該法每個(gè)樣品的分析時(shí)間非常短，僅需5min，這對(duì)于殘留分析是一個(gè)很有吸引力的過(guò)程，它還滿足在魚類中多粘菌素E的最低執(zhí)法限度所需的靈敏度的要求(200μg·kg－1)，且沒(méi)有來(lái)自母體的干擾，在動(dòng)物源性食品及水產(chǎn)品中測(cè)定多粘菌素E1、E2的的殘留是十分有用的。

4. MECC法

采用膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜法(MECC)對(duì)硫酸多粘菌素E藥物中的主要成分多粘菌素E1和E2進(jìn)行了分離和測(cè)定。分別考察了電泳電壓、表面活性劑種類、Brij-35(月桂醇聚氧乙烯醚)濃度、乙腈含量、磷酸鹽緩沖液的pH值、氯化鈉濃度等實(shí)驗(yàn)參數(shù)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。從而確定了的分離條件：電泳電壓為10kV，運(yùn)行緩沖液為含有30mmol·L－1Brij-35、5%(體積分?jǐn)?shù))乙腈、0.167mol·L－1氯化鈉的磷酸二氫鈉緩沖液(0.01mol·L－1，pH4.1)。在優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)條件下，E1和E2得到了較好的分離，分離度達(dá)到1.94。以多粘菌素E1為例，柱效和峰面積的日間及日內(nèi)測(cè)定的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(ＲSD)均小于5%。

主要參考資料

[1] CN201110032464.7多黏菌素E(黏菌素)組合物及其制備方法和用途

[2] 泡沫分離提取多粘菌素E的工藝研究

[3] 醫(yī)師案頭用藥參考

[4] 多粘菌素E檢測(cè)方法的研究新進(jìn)展