細(xì)胞色素C又被稱(chēng)為血紅素，是一種含鐵卟咻基團(tuán)的蛋白質(zhì)，在線粒體呼吸鏈上位于細(xì)胞色素b和細(xì)胞色素aa3之間。細(xì)胞色素C廣泛存在于動(dòng)物的需氧組織中，集中分布于動(dòng)物心肌細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的線粒體膜的外表面。它在生物氧化過(guò)程中是一個(gè)非常重要的電子傳遞體，可加速酶促作用的進(jìn)行。
細(xì)胞色素C可以治療哪些疾??？
細(xì)胞色素C是一種細(xì)胞呼吸激活劑，其溶液可用于各種組織缺氧急救的輔助治療，如一氧化碳中毒、催眠藥中毒、氰化物中毒、新生兒窒息、嚴(yán)重休克期缺氧、腦血管意外、腦震蕩后遺癥、麻醉及肺部疾病引起的呼吸困難和各種心臟疾患引起的心肌缺氧的治療。尤其在病情惡化搶救時(shí)，靜脈注射細(xì)胞色素C有較好的效果。
細(xì)胞色素C的制備
細(xì)胞色素C易溶于水，對(duì)熱、干燥、酸比較穩(wěn)定，易提取。目前多以豬心為原料制備，其提取流程見(jiàn)下圖：
樣品（豬心）處理
（1）采用新鮮或冷凍豬心，除盡脂肪、血管和韌帶，洗盡積血，切成小快，放入絞肉機(jī)中絞碎(兩遍)；
（2）稱(chēng)取豬心碎肉200克，加蒸餾水300毫升；
（3）用電磁攪拌器攪挫提取，再用1molL的硫酸調(diào) PH=4.0，(需要不斷調(diào)整)攪拌提取1.5小時(shí)。用1mol/L的氨水調(diào)PH=6.0，停止攪拌。
（4）四層紗布擠壓過(guò)濾，收集濾液。
中和
用1mol/L的氨水調(diào)濾液PH=7.2-7.5，靜置20~30分鐘，使沉淀沉下。過(guò)濾除雜質(zhì)，下部渾濁液離心 (3000rpm,15min)。合并得到的紅色清夜，測(cè)量體積。
吸附與洗脫
吸附：加10%人造沸石→磁力攪拌器攪拌吸附1h→蒸餾水洗3次→0.2%NaCI溶液洗3次→蒸餾水洗3次→濾出人造沸石待用；
洗脫：在柱中裝人造沸石體積的三分之二蒸餾水→將沸石放入柱中→裝滿25%的硫酸銨溶液進(jìn)行洗脫，流速控制在2ml/min以下，收集紅色的洗脫液
鹽析
為了進(jìn)一步提純細(xì)胞色素C，向洗脫液中緩慢加入固體硫酸，(即100ml洗脫液加17g硫酸按）邊加邊攪拌，放置30分鐘，雜蛋白沉淀析出，過(guò)濾，收集紅色透亮的細(xì)胞色素C濾液，測(cè)量體積。
TCA沉淀
按8%體積滴加TCA，邊加邊攪拌。此時(shí)細(xì)胞色素帶正電荷，與其結(jié)合生成可逆沉淀析出，立即離心(3000rpm，15min),收集沉淀(若上清液仍為紅色，倒出后再補(bǔ)加5%體積的TCA，再次離心收集沉淀)。沉淀用少量去離子水溶解(體積不超過(guò)10mL)。
細(xì)胞色素C溶液的檢測(cè)
細(xì)胞色素C溶液是一種深紅色的澄清液體。以2020版《中國(guó)藥典》為準(zhǔn)則，其檢測(cè)方法如下：
含鐵量
標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液：取硫酸鐵銨50g，加水300ml與硫酸6ml的混合溶液溶解后，加水適量使成1000ml，搖勻。精密量取25ml，置碘瓶中，加鹽酸5ml，混合，加碘化鉀試液12ml，密塞，靜置10分鐘，用硫代硫酸鈉滴定液（0.1mol/L）滴定，至近終點(diǎn)時(shí)，加淀粉指示液1ml，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失。每1ml硫代硫酸鈉滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于5.585mg的Fe。根據(jù)硫代硫酸鈉滴定液（0.1mol/L）消耗的量（ml），計(jì)算每1ml中含F(xiàn)e量（mg）。精密量取適量，加硫酸稀釋液（取稀硫酸2ml，用水稀釋至500ml）制成每1ml中含23μg的Fe。
供試品溶液：精密量取本品適量（約相當(dāng)于細(xì)胞色素C100mg），置10ml量瓶中，用水稀釋至刻度。
測(cè)定法：精密量取供試品溶液5ml，置已熾灼至恒重的坩堝中，蒸干，在105℃干燥至恒重，精密稱(chēng)定重量W1，緩緩熾灼至完全炭化后，繼續(xù)在500～600℃熾灼使完全灰化并恒重，精密稱(chēng)定重量W2。另精密量取供試品溶液1ml，置25ml量瓶中，加30%過(guò)氧化氫溶液0.7ml與稀硫酸0.5ml，置水浴中，加熱30分鐘，取出，放冷，精密加入聯(lián)吡啶試液2ml，置冷水浴中，緩緩加入亞硫酸鈉試液5ml，隨加隨振搖，置60～70℃水浴中，加熱30分鐘，取出，放冷，用水稀釋至刻度，搖勻，在522nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度A1，另精密量取標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液2ml，置25ml量瓶中，照上述方法，自“加30%過(guò)氧化氫溶液0.7ml”起，依法操作，測(cè)定吸光度A2，按下式計(jì)算，
限度 ：應(yīng)為0.40%～0.46%。
含量測(cè)定
照紫外-可見(jiàn)分光光度法（通則0401）測(cè)定：
供試品溶液：精密量取含鐵量項(xiàng)下的供試品溶液1ml，置50ml量瓶中，用磷酸鹽緩沖液（取磷酸二氫鈉1.38g與磷酸氫二鈉31.2g，加水適量使溶解并制成1000ml，調(diào)節(jié)pH值至7.3）稀釋至刻度，加連二亞硫酸鈉約15mg，搖勻。
測(cè)定法：取供試品溶液，在約550nm的波長(zhǎng)處，以間隔0.5nm找出最大吸收波長(zhǎng)，測(cè)定吸光度，按細(xì)胞色素C的吸收系數(shù)（E1%1CM）為23.0計(jì)算。
細(xì)胞色素C活力測(cè)定
取磷酸鹽緩沖液(0.2mol/L)5ml、琥珀酸鹽溶液1.0ml與供試品溶液0.5ml(如系還原型制劑，應(yīng)加入0.01mol/L鐵氰化鉀溶液0.05ml)，置25ml具塞比色管中，加去細(xì)胞色素C的心懸浮液0.5ml與氰化鉀溶液1.0ml，加水稀釋至10ml，搖勻，以同樣的試劑作空白，照紫外-可見(jiàn)分光光度法(通則0401)，在550nm的波長(zhǎng)處附近，間隔0.5nm找出最大吸收波長(zhǎng)，并測(cè)定吸光度，直至吸光度不再增大為止，作為酶還原吸光度；然后各加連二亞硫酸鈉約5mg，搖勻，放置約10分鐘，在上述同一波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，直至吸光度不再增大為止，作為化學(xué)還原吸光度；按下式計(jì)算：
