背景^[1-7]

辣根過氧化物酶標記Streptavidin（鏈霉親和素）分子量為66kD，可以高度特異性地和生物素(Biotin)結(jié)合。Streptavidin和生物素的親和常數(shù)為Kd=10-15M。Streptavidin是一個4聚體蛋白，可以同時結(jié)合4個生物素分子。Streptavidin的中文名為鏈霉親和素，從Streptomyces adidinii中純化獲得，和雞蛋清來源的Avidin(親和素)在空間結(jié)構(gòu)以及與生物素的親和力方面具有高度的相似性。

和Avidin不同的是，Streptavidin是一種非糖基化蛋白，并且基本不帶電荷。Avidin的pI=～10.5，在中性pH條件下呈堿性。由于Streptavidin和Avidin相比在中性條件下不帶電荷，因此Streptavidin的非特異性結(jié)合比Avidin低很多，這樣檢測時的非特異性背景就低很多。因此目前在生物素檢測時通常使用Streptavidin替代Avidin。鏈霉抗生物素蛋白同源四聚體對生物素（也稱為維生素B7或維生素H）具有非常高的親和力。用解離常數(shù)（K d）≈10的量級-14摩爾/L，生物素與鏈霉抗生物素蛋白的結(jié)合是自然界中已知的最強的非共價相互作用之一。

由于鏈霉抗生物素蛋白-生物素復(fù)合物對有機溶劑，變性劑（例如氯化胍），去污劑（例如SDS，Triton），蛋白水解酶以及極端溫度和pH的抗性，鏈霉抗生物素蛋白廣泛用于分子生物學(xué)和生物納米技術(shù)。辣根過氧化物酶最常見的用途是各種生物分子的純化或檢測。強鏈霉抗生物素蛋白-生物素鍵可用于將各種生物分子彼此連接或連接到固體支持物上。

需要惡劣的條件來破壞鏈霉抗生物素蛋白-生物素相互作用，這經(jīng)常使被純化的目的蛋白質(zhì)變性。然而，已經(jīng)表明，在70℃以上的水中短暫孵育將可逆地破壞相互作用（至少對于生物素化的DNA）而不使變性鏈霉抗生物素蛋白變性，允許重復(fù)使用鏈霉抗生物素蛋白固體支持物。鏈霉抗生物素蛋白的進一步應(yīng)用是用于純化和檢測用Strep-tag進行基因修飾的蛋白質(zhì)肽。鏈霉抗生物素蛋白廣泛用于蛋白質(zhì)印跡和與一些報告分子綴合的免疫測定。

應(yīng)用^[8]

辣根過氧化物酶標記Streptavidin可以用于生物素(Biotin)標記的抗體、核酸、蛋白或其它生物素標記分子的檢測。

具體用途包括Western、ELISA、免疫組化或免疫細胞化學(xué)、原位雜交、Southern、Northern、EMSA等。在檢測細胞內(nèi)細胞因子的生物素-鏈霉親和素免疫細胞化學(xué)法的建立及初步應(yīng)用的實驗中建立檢測細胞內(nèi)細胞因子的生物素-鏈霉親和素免疫細胞化學(xué)法(BSA-ICC)并作臨床初步應(yīng)用。

方法從健康人外周血單個核細胞(PBMC)中富集CD4細胞,加入莫能霉素,用不同濃度的佛波醇酯(PMA)和鈣離子載體(A23817)誘導(dǎo)CD4細胞不同時間,比較其胞內(nèi)表達白細胞介素-2(IL-2)/白細胞介素-4(IL-4)的細胞百分率,確定最適誘生條件;用不同稀釋度的IL-2M cAb、IL-4M cAb、不同濃度的生物素化羊抗鼠IgG(b io-SAM IgG)和辣根過氧化物酶標記的鏈霉親和素(HRP-SA)作棋盤配比試驗,確認M cAb、b io-SAM IgG和HRP-SA的最適濃度,根據(jù)上述結(jié)果建立了檢測細胞內(nèi)細胞因子的BSA-ICC法。

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