背景及概述[1][2]
五倍子又稱文蛤、木附子、百蟲倉、角倍、肚倍，為五倍子蚜蟲在漆樹科植物鹽膚木、青麩楊或紅麩楊葉子上寄生所形成的早癭。五倍子適宜生長(zhǎng)在溫暖濕潤(rùn)的山區(qū)和丘陵。我國(guó)主產(chǎn)區(qū)集中在貴州、四川、湖北、湖南、陜西、云南等6省，這些省的五倍子產(chǎn)量約占全國(guó)總產(chǎn)量的90以上。此外，河南、甘肅、廣東、安徽、浙江、江西、福建、山西等地亦產(chǎn)。五倍子的主要成分為單寧酸，屬水解類單寧，是制取沒食子酸的主要原料。
沒食子酸(gallic acid，GA)又名五倍子酸，是一種天然產(chǎn)物化學(xué)成分，化學(xué)命名為3，4，5-三羥基苯甲酸，具有很高的藥用價(jià)值。廣泛存在于掌葉大黃、大葉桉、山茱萸、干屈菜、馬桑、化香樹、烏桕、石榴、趕黃草、阿拉伯相思樹等植物中，是自然界存在的一種多酚類化合物。沒食子酸又名五倍子酸、倍酸，化學(xué)名3，4，5-三羥基苯甲酸(C H O )，為白色或淡黃色針狀結(jié)晶或粉末，通常是以一水合物的形式存在。
沒食子單寧是沒食子酸與多元醇生成的酯，容易在酸、堿、酶的催化作用下水解，生成沒食子酸和多元醇，由此可制備多種與沒食子酸相關(guān)的衍生物。研究者們不斷發(fā)現(xiàn)沒食子酸的藥理作用，并進(jìn)行了深入研究使其在臨床上得到廣泛應(yīng)用。
應(yīng)用[1]
1. 抗腫瘤作用
1）抑制腫瘤形成：腫瘤的形成是多因素、多步驟、多基因突變的過程。已知許多化學(xué)致癌物能誘發(fā)和促進(jìn)腫瘤形成，而沒食子酸對(duì)腫瘤形成各階段都有預(yù)防和抑制作用。沒食子酸可以抑制鳥苷酸脫羧酶(ODC)的促癌作用。
2）細(xì)胞毒作用：沒食子酸能抑制和直接殺傷腫瘤細(xì)胞。用傳統(tǒng)中醫(yī)藥學(xué)方法篩選抗腫瘤藥物時(shí)發(fā)現(xiàn)，GA在IC 為4.8~13.2 ml時(shí)，對(duì)原代培養(yǎng)的大鼠肝細(xì)胞和巨噬細(xì)胞顯細(xì)胞毒作用.對(duì)纖維母細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞顯示較小的細(xì)胞毒作用。
3）抑制腫瘤血管形成：新生血管形成在腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移中是至關(guān)重要的一個(gè)病理過程，而血管內(nèi)皮細(xì)胞(VEC )的活化、增殖、遷移及小管形成是其關(guān)鍵步驟。研究發(fā)現(xiàn)，由于沒食子酸與其他未探明提取物之間的協(xié)同或者有效的促進(jìn)作用抑制腫瘤血管的生長(zhǎng)，這些提示了一種天然且容易控制的給藥方案，也為沒食子酸具有抗VEC 再生提供臨床依據(jù) 。
4） GA作為多酚類物質(zhì)具有較強(qiáng)的抗氧化、抗自由基作用。氧化和自由基損傷被公認(rèn)是引起細(xì)胞DNA損傷進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞惡變的重要機(jī)制之一。
5）誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡：研究報(bào)道表明GA誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的敏感性不隨順鉑耐藥性而改變，指出GA可能使用于肺癌的治療，尤其是對(duì)抗腫瘤藥物耐藥的肺癌
2. 對(duì)肝臟的作用
我國(guó)的研究人員認(rèn)為GA具有抗乙肝病毒的功效。對(duì)抗乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究，采用酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)(ELISA)技術(shù)，選擇GA、云芝肝泰、乙肝沖劑和乙肝寧4種藥物進(jìn)行藥效試驗(yàn)。
結(jié)果抗HBsAg的藥效為GA(4.86)>(優(yōu)于)云芝肝泰(5.53)>乙肝沖劑(6.11)>乙肝寧(6.66)；抗HBeAg的藥效為乙肝寧(3.92)>乙旰沖劑(4.87)>GA(5.48)>云芝旰(5.51)；若綜合評(píng)價(jià)藥效指數(shù)，則抗乙型肝炎的排列順序?yàn)镚A(5.17)>乙肝寧(5.29)>乙肝沖劑(5.49)>云芝肝泰(5.52)?？梢?，GA是實(shí)驗(yàn)室篩出的抗HBsAg/HBeAg的有效藥物。
3. 對(duì)血管的作用
研究了GA對(duì)鼠胸主動(dòng)脈的血管作用，顯示GA對(duì)用苯福林或前列腺素F(2/ )處理已收縮的完整內(nèi)皮動(dòng)脈具有收縮作用，而對(duì)裸露的內(nèi)皮動(dòng)脈，GA無血管收縮作用。用N(G)-硝基-L-精氨酸甲酯(一種NO合成抑制劑)預(yù)先處理可消除GA誘導(dǎo)的血管收縮作用；用吲哚美辛或BQ610預(yù)先處理不能消除GA 的縮血管作用。
在內(nèi)皮裸露動(dòng)脈用GA預(yù)先處理可顯著減少乙酰膽堿誘導(dǎo)的血管松弛作用，也能降低硝普納的血管松弛作用。這些結(jié)果顯示GA誘導(dǎo)的內(nèi)皮依賴性收縮和對(duì)內(nèi)皮依賴性松弛，而不是內(nèi)皮非依賴性松弛的強(qiáng)烈抑制作用，可能是通過抑制內(nèi)皮NO 的生成。
4. 防治艾滋病
沒食子單寧是由沒食子酸與多元醇(如葡萄糖、奎尼酸、莽草酸等)形成的酯。沒食子單寧的常見種類有：?jiǎn)螌幩?中國(guó)五倍子單寧)、土耳其倍子單寧和塔拉單寧等。沒食子單寧往往是不同倍?；潭鹊孽サ幕旌衔铩]食子單寧是單寧應(yīng)用于抗H IV研究的一類主要品種 。
5. 殺錐蟲作用
非洲錐蟲是鞭毛狀原生寄生蟲，可導(dǎo)致人畜睡眠障礙。GA對(duì)血流型和前循環(huán)型錐蟲均顯強(qiáng)效殺蟲作用，且殺蟲作用依賴于錐蟲的數(shù)量：GA對(duì)血流型的LD50值為(46.96_+1.28)I*m，對(duì)前循環(huán)型的LD50為(30.02_+3.49) m。GA殺錐蟲的作用機(jī)制研究表明，預(yù)先用SOD 和(或)過氧化氫酶處理可顯著下GA誘導(dǎo)的殺錐蟲作用。
6. 為抗炎、抑菌和抗病毒作用
研究了沒食子酸的抗炎及抑菌作用，顯示沒食子酸對(duì)代表急性炎癥的的蛋清、右旋糖苷、5一輕色胺及代表慢性炎癥的甲醛所引起的實(shí)驗(yàn)性大鼠關(guān)節(jié)腫脹有顯著的消炎作用；取一定量的沒食子酸，加水研溶后加入9ml瓊脂培養(yǎng)基中。
沒食子酸對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、巴氏桿菌、鏈球菌均有較強(qiáng)的抑制作用，抑菌效果明顯優(yōu)于黃連素，略差于煙酸諾氟沙星。采用細(xì)胞病變法測(cè)定普洱茶中功能成分單體沒食子酸的抗NDV病毒活性。結(jié)果表明，沒食子酸具有抗NDV病毒活性。實(shí)驗(yàn)利用細(xì)胞模型探討了沒食子酸對(duì)PPAK 受體作用的影響。。
7. 降糖降酯作用
以降糖降脂活性為檢測(cè)指標(biāo)，研究了沒食子酸對(duì)淀粉酶的影響，結(jié)果表明，沒食子酸對(duì)淀粉酶有較強(qiáng)的抑制作用。
制備[3]
以五倍子為原料提取沒食子酸的方法包括化學(xué)法和生物法，化學(xué)法主要有酸水解法和堿水解法，生物法有發(fā)酵法和酶法。
1. 化學(xué)法
1）酸水解法：?jiǎn)螌幩芤涸诩訜釛l件下，以硫酸作催化劑進(jìn)行均相酸催化反應(yīng)。
一個(gè)單寧分子與n個(gè)水分子參加反應(yīng)，在酸性條件下，加熱水解得到一個(gè)葡萄糖(C HO )分子和"個(gè)沒食子酸分子。
2） 堿水解法
單寧水溶液在堿性條件下水解，然后川酸中和酸化即生成沒食子酸。
2. 生物法
1）發(fā)酵法：利用微生物在含單寧水溶液中進(jìn)行發(fā)酵，以單寧中的葡萄糖作碳源，供微生物生長(zhǎng)繁殖。微生物經(jīng)誘導(dǎo)產(chǎn)生生物酶催化單寧水解。工藝流程：五倍子破碎篩分一用水浸出得到30單寧溶液一加入黑霉菌種子(在五倍子上分離培養(yǎng))一發(fā)酵8～9 d一濾出沒食子酸沉淀物一水洗滌一粗沒食子酸一清水溶解一重結(jié)晶一成品沒食子酸
2）酶法：酶法的關(guān)鍵是篩選、制取高效的生物酶。單寧酶為乙?；饷?，屬于孢外誘導(dǎo)的酰基水解酶，能高效、專一、定向裂解單寧分子中的酯鍵、縮酚鍵和糖苷鍵，使之生成沒食子酸。在適當(dāng)條件下，多種霉菌與誘導(dǎo)物單寧作用，都能生成單寧酶。
一般采用的菌株為黑曲霉。工藝流程：酶種培養(yǎng)一發(fā)酵制酶一(加原料)水解制酸一過濾一濃縮一粗結(jié)晶一分離一脫色一次結(jié)晶一二次結(jié)晶一干燥一粉碎一成品沒食子酸。
主要參考資料
[1] 柯發(fā)敏, 張開蓮. 沒食子酸的研究進(jìn)展[D]. , 2011.
[2] 許維國(guó). 五倍子酸藥用價(jià)值的相關(guān)研究 [D][D]. 吉林大學(xué), 2013.
[3] 趙拉. 五倍子制備沒食子酸的研究進(jìn)展[J]. 化學(xué)與生物工程, 2008, 25(5): 5-7.