背景及概述[1]
L-羥基脯氨酸是一種常見的非標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)氨基酸，作為抗病毒藥物阿扎那韋的主要原料，具有很高的應(yīng)用價(jià)值。L-羥基脯氨酸一般用作食品添加劑（用作甜味劑使用，用量相對(duì)較?。?，醫(yī)藥方面用作培南側(cè)鏈的中間體使用相對(duì)用量較大。
酶解法制備[4]
酶解法制L-羥基脯氨酸的方法，包括以下步驟：
S1、培養(yǎng)罐先進(jìn)行滅菌操作，再將液體培養(yǎng)基投入培養(yǎng)罐中，然后進(jìn)行接種；
S2、將L-脯氨酸生產(chǎn)菌株接入培養(yǎng)罐內(nèi)，接種溫度30℃，pH7.0，將接種瓶針頭插入接種口，接種結(jié)束后，用浸過體積濃度75％乙醇的棉花球放置在接種口上，撥出接種針頭，開始培養(yǎng)；
S3、培養(yǎng)：培養(yǎng)溫度30℃、攪拌轉(zhuǎn)速200rpm、培養(yǎng)時(shí)間8小時(shí)，在發(fā)酵過程的溶氧回升至10％時(shí)開始流加葡萄糖，將發(fā)酵過程的溶氧控制在10％，最終葡萄糖含量小于10g/L，菌種在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)得到成熟的種子；
S4、成熟的種子移入發(fā)酵罐的發(fā)酵培養(yǎng)基中發(fā)酵代謝產(chǎn)生L-羥基脯氨酸，發(fā)酵結(jié)束時(shí)羥脯氨酸生成濃度在30g/L、糖濃度≦2.0％；
S5、將L-羥基脯氨酸發(fā)酵液微濾，得到微濾清液和微濾截留液，調(diào)節(jié)微濾清液pH值為6，然后用強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂吸附，接著用弱堿性陰離子交換樹脂吸附得到離子交換液，強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂與弱堿性陰離子交換樹脂的體積比為3:4；
S6、將微濾清液用活性炭在溫度30℃脫色后，50℃濃縮至體積為濃縮前的1/8～1/6，降溫20℃離心得到L-羥基脯氨酸的成品，多余的母液進(jìn)行多次強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂吸附，接著用弱堿性陰離子交換樹脂吸附得到離子交換液，重復(fù)操作，得到L-羥基脯氨酸的成品。
步驟S4中，發(fā)酵培養(yǎng)基投入發(fā)酵罐中，蒸汽加熱到100℃，壓力0.1MPa，保溫10分鐘，冷卻降溫至35℃，調(diào)pH到6.5，備接種。
L-脯氨酸生產(chǎn)菌株為谷氨酸棒桿菌。
強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂為苯乙烯-二乙烯苯共聚體上帶有磺酸基的陽離子交換樹脂。弱堿性陰離子交換樹脂為聚丙烯酸系陰離子交換樹脂。
拉曼光譜檢測(cè)[1]
CN201810038019.3提供了一種能提高L-羥基脯氨酸拉曼光譜檢測(cè)精確度的方法，能減小其他物質(zhì)對(duì)L-羥基脯氨酸的拉曼光譜的干擾，保證檢測(cè)的準(zhǔn)確性。另外，研磨溴化鉀時(shí)按同一方向均勻用力，能避免在研磨過程中溴化鉀產(chǎn)生轉(zhuǎn)晶的現(xiàn)象，從而保證不影響測(cè)定結(jié)果。為實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明通過以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)：
一種能提高L-羥基脯氨酸拉曼光譜檢測(cè)精確度的方法，包括以下步驟：
a、分別將樣品粉末和溴化鉀用烘箱中進(jìn)行干燥，干燥時(shí)間為20-30min，并分別保存；
b、稱取適量的樣品置于研缽中進(jìn)行研磨，得到樣品粉末，備用；
c、將步驟a中干燥好的溴化鉀置于研缽中進(jìn)行研磨，研磨溴化鉀時(shí)按同一方向均勻用力，所得記為溴化鉀粉末；
d、將步驟b中所得樣品粉末和步驟c中所得的溴化鉀粉末混合，并超聲分散40-80s，后得到混合粉末；
e、將步驟d中所得的混合粉末用壓片機(jī)進(jìn)行壓片；
f、將壓片置于拉曼光譜檢測(cè)儀中，在100-3700cm-1范圍內(nèi)進(jìn)行拉曼光譜掃描獲得拉曼光譜圖；
g、當(dāng)423cm-1、850cm-1、1070cm-1、1227cm-1、1326cm-1、1398cm-1、2956cm-1、2987cm-1、2996cm-1、3036cm-1±3cm-1處存在明顯特征拉曼峰時(shí)，奶粉中存在L-羥基脯氨酸。
應(yīng)用[2-3]
CN201910830617.9公開了一種(4S)-N-Boc-4--甲氧基甲基-L-脯氨酸的合成方法，包括以L-羥基脯氨酸為起始原料，經(jīng)過Boc保護(hù)得到N-Boc-L-羥基脯氨酸的步驟；將N-Boc-L-羥基脯氨酸溶于溶劑中與TEMPO(四甲基哌啶氮氧化物)氧化反應(yīng)得到(2S)-N-Boc-4-氧代吡咯烷-2-羧酸的步驟；將(2S)-N-Boc-4-氧代吡咯烷-2-羧酸和甲氧基甲基三苯基氯化鏻溶于溶劑中進(jìn)行wittig反應(yīng)制得(2S)-N-Boc-4-甲氧基甲叉吡咯烷-2-羧酸的步驟；將(2S)-N-Boc-4-甲氧基甲叉吡咯烷-2-羧酸和叔丁胺溶于水中經(jīng)氫化反應(yīng)制得(4S)-N-Boc-4--甲氧基甲基-L-脯氨酸；該反應(yīng)縮短了反應(yīng)步驟；避免了劇毒氰化物的使用，增加了安全性和降低了環(huán)保壓力；搞高了原子經(jīng)濟(jì)性，減少了廢物的排放；原料成本大幅下降。
CN201810996468.9公開了一種N-(O,O-二異丙基磷?；?-反-4-羥基-L-脯氨酸的制備方法。向純化水中加入L-羥基脯氨酸，降溫，攪拌下開始滴加25％氫氧化鈉溶液，調(diào)節(jié)pH＝9.0-10，攪拌至澄清，待用；低溫下向亞磷酸二異丙酯中滴加次氯酸鈉，快速攪拌保溫反應(yīng)，氣相檢測(cè)DIPP反應(yīng)完全后加入亞硫酸氫鈉；加入制備好的L-羥基脯氨酸溶液，控制反應(yīng)體系pH保持堿性，加畢保溫至反應(yīng)液pH不再變化；用鹵代烷烴洗滌，分層，水相使用鹽酸調(diào)至酸性，加入酯類有機(jī)溶劑萃取，有機(jī)相減壓濃縮，降溫抽濾，40℃真空干燥，得到白色粉末狀固體。本發(fā)明所述的制備方法副反應(yīng)少，收率高，純度高，反應(yīng)條件溫和。
參考文獻(xiàn)
[1][中國發(fā)明]CN201810038019.3一種能提高L-羥基脯氨酸拉曼光譜檢測(cè)精確度的方法
[2] CN201910830617.9一種(4S)-N-Boc-4--甲氧基甲基-L-脯氨酸的合成方法
[3] CN201810996468.9N-(O,O-二異丙基磷酰基)-反-4-羥基-L-脯氨酸的制備方法
[5] [中國發(fā)明] CN201910412628.5 酶解法制L-羥基脯氨酸的方法