背景及概述[1][2]
酸水解酪蛋白是以優(yōu)質(zhì)的酪蛋白為原料，用強酸深度水解、脫色、脫鹽、濃縮、噴霧干燥而成的白色或淡黃色粉狀物。其極易吸潮、易溶于水、具有醬香味，是酪蛋白的酸性分解物，可以分解到氨基酸的程度。
本品廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥制藥、生物發(fā)酵、動物飼料、植物組織培養(yǎng)、化妝品、煙草工業(yè)（增香）、食品衛(wèi)生檢驗等專業(yè)與各類培養(yǎng)基的配置，特別是配置各類半綜合培養(yǎng)基時，本產(chǎn)品是主要的基礎(chǔ)成分，如：半綜合百日咳培養(yǎng)基、半綜合流腦培養(yǎng)基、多糖體流腦半綜合液體培養(yǎng)基、金黃色葡萄球菌A蛋白培養(yǎng)基，還有硫乙醇酸鹽無菌試驗培養(yǎng)基，及厭氧菌培養(yǎng)基和活性炭瓊脂培養(yǎng)基等等，均以酸水解酪蛋白為基礎(chǔ)。
制備[1]
1水解
準(zhǔn)確稱取100g酪蛋白加入到1000ml三頸瓶中，然后依次加入100ml的蒸餾水?dāng)嚢杈鶆颉?00ml 12mol/L的濃鹽酸攪拌均勻，安裝上冷凝管、電動攪拌、電熱套，邊攪拌邊升溫，當(dāng)溫度達到90℃時溶液整體沸騰，持續(xù)恒溫攪拌水解 3hr，待溶液水解徹底無酪蛋白顆粒后停止水解。
2過濾
在第1步水解好的水解液中加入100ml蒸餾水，用80目尼龍網(wǎng)過濾。
3濃縮
將上述過濾液分次加入到1000ml圓底燒瓶中，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓到 650mmHg濃縮至膏狀，通過負(fù)壓加入100ml蒸餾水，降低旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀轉(zhuǎn)速，使其 完全溶解。然后再次減壓濃縮至膏狀，如此反復(fù)濃縮洗滌三次，即可完成洗滌，此時pH值3.5。
4脫色
將上述洗滌好的水解液加入按固含量質(zhì)量分?jǐn)?shù)5％的活性炭回流4.0小時， 用抽濾瓶、布氏漏斗熱減壓650mmHg過濾，濾液呈淺黃色，pH值為2.0。
5脫酸
脫色后的淺黃色濾液經(jīng)強堿性陰離子201×7(717)樹脂一步法交換，收集pH值6.5～7.0段的交換液組分。
6干燥
經(jīng)樹脂交換好地溶液濃縮后、在壓力15MPa、溫度120℃下噴霧干燥，所得 產(chǎn)品呈乳白或淡黃色。
應(yīng)用[2-3]
CN201010122050.9公開了一種產(chǎn)白藜蘆醇細(xì)胞的制備方法及其專用懸浮培養(yǎng)基，本發(fā)明的專用懸浮培養(yǎng)基是在B5基本培養(yǎng)液或NN1969培養(yǎng)液中添加如下物質(zhì)得到的培養(yǎng)基：酸水解酪蛋白、NAA、KT、BA和碳源；其中酸水解酪蛋白的終濃度為0.015-0.030g/100ml、NAA的終濃度為0.01-1.00mg/L、KT的終濃度為0.1-2.00mg/L、BA的終濃度為0.05-1.00mg/L。本發(fā)明將外植體先誘導(dǎo)愈傷組織；再將愈傷組織轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)；然后利用紫外線照射的誘導(dǎo)方法確定高產(chǎn)白藜蘆醇的葡萄基因型。然后再確定高產(chǎn)白藜蘆醇的器官類型。最后通過懸浮培養(yǎng)，大量擴繁細(xì)胞并誘導(dǎo)處理，最終獲得高產(chǎn)白藜蘆醇細(xì)胞。
CN201010190788.9公開了一種番石榴焦腐病菌產(chǎn)孢培養(yǎng)基，由燕麥、葡萄糖、酸水解酪蛋白和番石榴果汁組成。分別以葡萄糖為碳源，以酸水解酪蛋白為氮源，提供了該菌產(chǎn)孢所需要的碳元素和氮元素；加入的生長因子—燕麥中的維生素則是調(diào)節(jié)微生物正常代謝所必需的；滿足了該菌的營養(yǎng)需要。本發(fā)明的番石榴焦腐病菌產(chǎn)孢培養(yǎng)基，培養(yǎng)7天產(chǎn)孢量4×103個孢子/25毫升培養(yǎng)基。
生物活性研究[4]
白貴杰等人探索了不同酸水解酪蛋白對W135群與Y群腦膜炎奈瑟菌（腦膜炎球菌）莢膜多糖產(chǎn)量的影響。方法分別以NaCl質(zhì)量分?jǐn)?shù)為37%和14%的酸水解酪蛋白作為有機氮源配制改良半綜合高鹽培養(yǎng)基和低鹽培養(yǎng)基,利用全自動細(xì)菌發(fā)酵罐分別在兩種培養(yǎng)基里培養(yǎng)W135群和Y群腦膜炎球菌,比較這兩種菌株在兩種培養(yǎng)基中的生長時間、收獲液菌密度(A600 nm值)、收獲液去菌體后與去復(fù)合多糖后上清中的莢膜多糖含量,以及純化后的精糖產(chǎn)量;比較高鹽培養(yǎng)基收獲液及其2倍稀釋液中不同終含量的十六烷基三甲基溴化銨（cetyltrimethylammonium bromide, CTAB）溶液對多糖沉淀效果的影響。
結(jié)果 W135群與Y群腦膜炎球菌在兩種培養(yǎng)基中的培養(yǎng)時間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）,但高鹽培養(yǎng)基收獲液的菌密度、收獲液去菌體后上清液中的多糖含量均高于低鹽培養(yǎng)基收獲液,差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）,而高鹽培養(yǎng)基收獲液純化后的精糖產(chǎn)量低于低鹽培養(yǎng)基,差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
高鹽培養(yǎng)液2倍稀釋后,在CTAB終體積分?jǐn)?shù)為0.04%時,W135群與Y群腦膜炎球菌多糖全部沉淀,而未稀釋高鹽培養(yǎng)液即使CTAB終體積分?jǐn)?shù)提高到0.14%,依然也不能完全沉淀W135群與Y群腦膜炎球菌多糖。結(jié)論不同酸水解酪蛋白對W135群和Y群腦膜炎球菌的生長密度和莢膜多糖產(chǎn)量有影響,用CTAB溶液沉淀莢膜多糖時需控制收獲液鹽含量。
主要參考資料
[1] [中國發(fā)明,中國發(fā)明授權(quán)] CN200710018245.7 酸水解酪蛋白的生產(chǎn)方法
[2] CN201010122050.9一種產(chǎn)白藜蘆醇細(xì)胞的制備方法及其專用懸浮培養(yǎng)基
[3] CN201010190788.9番石榴焦腐病菌產(chǎn)孢培養(yǎng)基
[4] 白貴杰,張新莊,張麗芝,楊田瑤,任克明,張軼,侯亞莉,王晶,劉方蕾,羅樹權(quán),沈榮.不同酸水解酪蛋白對W135群和Y群腦膜炎奈瑟菌莢膜多糖產(chǎn)量的影響[J].微生物學(xué)免疫學(xué)進展,2019,47(03):27-31.