背景[1-3]
免疫細(xì)胞無血清培養(yǎng)基是無血清、不含異源動物成分（Xeno-free）的人免疫細(xì)胞培養(yǎng)基，可用于人淋巴細(xì)胞、CIK、DC、NK等各類免疫細(xì)胞的培養(yǎng)，具有很高的成活率、殺傷活性和擴(kuò)增倍數(shù)。
無血清培養(yǎng)基，顧名思義，就是在細(xì)胞培養(yǎng)中不需要添加血清，但是在某些應(yīng)用中可能要添加生長因子或細(xì)胞因子。無血清培養(yǎng)基中添加了血清的主要成分：粘附因子、生長因子、必需的營養(yǎng)物質(zhì)和激素等，能減少血清帶來的不利因素，使細(xì)胞培養(yǎng)的條件更穩(wěn)定。經(jīng)歷了天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基后，無血清培養(yǎng)基和無血清培養(yǎng)成為當(dāng)今細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域的一大趨勢。采用無血清培養(yǎng)可簡化純化和鑒定各種細(xì)胞產(chǎn)物的程序，避免病毒污染造成的危害。無血清培養(yǎng)基是不需要添加血清就可以維持細(xì)胞在體外較長時間生長繁殖的合成培養(yǎng)基。
應(yīng)用[4][5]
用于人表皮干細(xì)胞的分離和培養(yǎng)的研究
研究表皮干細(xì)胞的體外分離、培養(yǎng)及鑒定方法,觀察表皮干細(xì)胞在有血清和無血清培養(yǎng)基中的生長特性,并對其在體外的培養(yǎng)條件進(jìn)行探索,以期在體外獲得人表皮干細(xì)胞的良好增殖。
方法①采用DispaseⅡ酶和胰蛋白酶兩步法分離出角朊細(xì)胞和成纖維細(xì)胞,并以人成纖維細(xì)胞條件培養(yǎng)基為基礎(chǔ)制備表皮干細(xì)胞培養(yǎng)基,用以人表皮干細(xì)胞（Ⅳ型膠原快速粘附法富集分離）的體外培養(yǎng),以角朊細(xì)胞培養(yǎng)為對照組。觀察人表皮干細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài)和一般生長狀態(tài),比較人表皮干細(xì)胞和角朊細(xì)胞的克隆形成率和克隆維持時間,同時采用免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測β1整合素和K19的表達(dá),鑒定表皮干細(xì)胞。②將富集分離出的人表皮干細(xì)胞分兩組培養(yǎng),分別加入同源成纖維細(xì)胞條件培養(yǎng)基配制的人表皮干細(xì)胞有血清培養(yǎng)基和無血清培養(yǎng)基,觀察和比較在這兩種培養(yǎng)基中的細(xì)胞形態(tài)、克隆形成率、生長曲線、β1整合素和K19的強(qiáng)陽性表達(dá)率。
結(jié)果①在Ⅳ型膠原快速包被的培養(yǎng)皿中快速貼壁細(xì)胞經(jīng)繼續(xù)培養(yǎng),可見細(xì)胞克隆數(shù)增多,兩周后可見大克隆形成。與角朊細(xì)胞相比,表皮干細(xì)胞有更強(qiáng)的克隆形成能力并可形成較大克隆,兩者的形成率分別為17.04±1.01%和8.72±0.73%,兩者比較有顯著性差異（P<0.01）;人表皮干細(xì)胞β1整合素和K19免疫細(xì)胞化學(xué)染色呈強(qiáng)陽性。②細(xì)胞形態(tài)學(xué)分析和生長曲線均表明,培養(yǎng)5天前,無血清培養(yǎng)的人表皮干細(xì)胞增殖細(xì)胞數(shù)較有血清培養(yǎng)的多,第9天達(dá)到細(xì)胞基本融合狀態(tài)并出現(xiàn)接觸抑制;而在有血清培養(yǎng)基中,人表皮干細(xì)胞則繼續(xù)增殖,第11天時達(dá)到生長峰值,隨后進(jìn)入平臺期。克隆性分析表明,兩種培養(yǎng)基培養(yǎng)的表皮干細(xì)胞均呈克隆性生長,但比較克隆數(shù)目和大小、克隆形成率和克隆持續(xù)時間,有血清組明顯優(yōu)于無血清組（P<0.01）。細(xì)胞周期分析顯示,人表皮干細(xì)胞在有血清培養(yǎng)基中G0～G1期細(xì)胞比例明顯.
參考文獻(xiàn)
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