背景及概述^[1-2]

牛肉膏是以牛肉的抽出液濃縮而成的制品，含可溶性含氮化合物50%，可作微生物培養(yǎng)基。目前，牛肉膏是一種應(yīng)用最廣泛和最普通的細菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基，有時又稱為普通培養(yǎng)基，牛肉膏在常溫下是流態(tài)物質(zhì)，但粘度非常高、不易分離的，隨著溫度升高粘度就會急劇下降，變得易于分離。

在配制培養(yǎng)基需用到牛肉膏時，對于牛肉膏的稱量常用玻璃棒挑取，放在小燒杯或表面皿中稱量，用熱水溶化后倒入燒杯，或放在稱量紙上，稱量后直接放入水中，稍微加熱后牛肉膏與稱量紙分離，把稱量紙從燒杯中取出。但是由于牛肉膏在常溫下粘度大、不易分離等特性，使用玻璃棒之類的儀器很難一次性準(zhǔn)確地挑取一定量的牛肉膏放到小燒杯、表面皿或稱量紙上，需反復(fù)做挑取多次才能得到符合要求重量，在很多時候最終稱量的重量跟實際要求的重量存在較大的誤差。

應(yīng)用^[3-6]

牛肉膏主要可用作培養(yǎng)基，其應(yīng)用舉例如下：

1）用于一種低溫好氧反硝化菌的富集分離。包括如下步驟，(1)制備底泥懸濁液和富集培養(yǎng)液，并將底泥懸濁液與富集培養(yǎng)基混合進行數(shù)輪的富集培養(yǎng)獲得低溫好氧反硝化菌群；(2)制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基和牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基，對牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基進行高溫滅菌處理并制得固體平板；(3)對步驟(1)中得到的低溫好氧反硝化菌群進行單菌落分離，得到單菌落；并將得到的單菌落接種于步驟(2)中的滅菌的牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基，并進行杜氏管產(chǎn)氣檢驗，得到低溫好氧反硝化菌株；(4)利用牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基對獲得的低溫好氧反硝化菌株進行發(fā)酵培養(yǎng)得到低溫好氧反硝化菌液。

2）用于分離反硝化細菌，首先制備牛肉膏一蛋白胨液體培養(yǎng)基，加入瓊脂后加熱滅菌，冷凝成平板固體培養(yǎng)基，然后將混合微生物菌群均勻涂布于牛肉膏一蛋白胨平板，靜置冷凝后于生化培養(yǎng)箱30℃下培養(yǎng)7-10天，在形成的菌落中挑取單菌落到牛肉膏一蛋白胨平板劃線純化得到純菌，然后將純菌菌苔接種于氨氧化能力鑒定培養(yǎng)液，采用格利斯試劑直接點滴入適量培養(yǎng)液中進行硝化活性鑒定，鑒定試驗以不接純化菌株的氨氧化能力鑒定培養(yǎng)液作空白對照。本發(fā)明通過牛肉膏一蛋白胨瓊脂平板分離，氨氧化能力鑒定液體培養(yǎng)基培養(yǎng)和格利斯試劑顯色等步驟，可從混合微生物系中分離篩選反硝化細菌，具有簡便，重復(fù)性好，準(zhǔn)確可靠的特點。

3）用于制備固定化枯草芽孢桿菌：一、配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)液；二、活化枯草芽孢桿菌；三、將經(jīng)過處理的遠紅外細菌屋放入牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)液中，然后在無菌的環(huán)境下加入枯草芽孢桿菌菌懸液，在30℃恒溫培養(yǎng)箱中固定培養(yǎng)，即得。處理污水的方法：將25-35g固定化枯草芽孢桿菌加入到滅菌的有機污水中，在恒溫培養(yǎng)，即完成。采用本發(fā)明方法得到的遠紅外細菌屋固定枯草芽孢桿菌處理模擬高濃度有機污水的COD去除率為34%。本發(fā)明屬于水處理領(lǐng)域。

4）用于一種海膽源多粘芽孢桿菌抗腫瘤活性蛋白的制備，步驟為：取海膽卵研磨，將研磨液涂布于牛肉膏蛋白胨平板培養(yǎng)基上，37℃恒溫培養(yǎng)2天；挑取單菌落反復(fù)劃線培養(yǎng)至純菌株；得海膽共生多粘芽孢桿菌DNC2；將DNC2菌株在pH9的牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中35℃發(fā)酵1天，牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中牛肉膏和蛋白胨所占的質(zhì)量百分比分別為3%和6%；4000r/min離心去除菌體，在上清液中加入硫酸銨，硫酸銨的飽和終濃度為60%，4℃靜置過夜，10000r/min離心處理30min，將沉淀物用PBS緩沖液溶解后，再用截留分子量為3500道爾頓的透析袋透析4天，得海膽源多粘芽孢桿菌抗腫瘤活性蛋白。本方法操作簡單、成本低廉。

主要參考資料

[1] 中國百科大詞典

[2] CN201510512628.4牛肉膏量取器

[3] CN201710985946.1低溫好氧反硝化菌的富集分離方法及水體治理方法

[4] CN201310079767.3一種分離反硝化細菌的方法

[5] CN201310123176.1固定化枯草芽孢桿菌的制備方法及采用固定化枯草芽孢桿菌處理污水的方法

[6] CN201310034685.7一種海膽源多粘芽孢桿菌抗腫瘤活性蛋白的制備方法及其應(yīng)用