背景及概述

甲基睪酮又叫甲睪酮。本品為合成雄激素。能促進(jìn)男性性器官及副性征的發(fā)育和成熟;小劑量有對抗雄激素的作用，抑制子宮內(nèi)膜生長;大劑量使子宮內(nèi)膜萎縮，并抑制垂體前葉分泌促性腺激素;還具有明顯的促進(jìn)蛋白質(zhì)合成、代謝的作用，促進(jìn)鈣、磷、鉀離子的潴留，促進(jìn)肌肉發(fā)育和骨質(zhì)形成;骨髓機(jī)能低下時，較大劑量可刺激骨髓造血功能，促進(jìn)紅細(xì)胞的生成;還有增加遠(yuǎn)曲腎小管水、鈉再吸收和保留鈣的作用。用于睪丸素缺乏癥的補(bǔ)充治療及再生障礙性貧血、月經(jīng)過多、功能性子宮出血、子宮內(nèi)膜異位癥、子宮肌瘤、更年期綜合征、老年性骨質(zhì)疏松、轉(zhuǎn)移性乳腺癌及卵巢癌等。口服或舌下含服：5～10mg/次，10～20mg/d; 小兒再生障礙性貧血，1～2mg/(kg•d)，1～2 次/d;外用： 涂搽1～2次/d。不良反應(yīng)有頭暈、惡心、水腫; 大劑量 (每月300mg以上) 或長期用于女性病人，可能引起聲音變粗、毛發(fā)增多、痤瘡、肌肉肥壯、陰蒂增大等男性化表現(xiàn);對肝臟有較強(qiáng)的肝毒性，易引起中毒性肝炎或肝腫瘤，因而不適宜長期替代治療。本品與華法令、香豆素抗凝血藥合用，可延長和增加后者的抗凝血作用;與組胺藥、苯巴比妥、保泰松合用，其療效減弱。肝、腎功能不全及心臟病患者慎用;當(dāng)發(fā)現(xiàn)男性化和肝功能障礙時應(yīng)立即停藥;有過敏反應(yīng)者應(yīng)停藥;前列腺癌患者、孕婦及哺乳期婦女禁用。

檢測

甲基睪酮（Methyltestosterone，MT），是一種人工合成的類固醇激素，具有增強(qiáng)雄性體性特征和促生長等作用。在水產(chǎn)養(yǎng)殖行業(yè)中為提高魚體成活率高和增加產(chǎn)量，常在魚苗培育過程中通過在魚飼料或其它投入品摻入一定量的MT，實現(xiàn)魚體的雄性化，達(dá)到單性養(yǎng)殖生產(chǎn)的目的。研究表明，MT在水產(chǎn)動物體內(nèi)的代謝緩慢，痕量的殘留可能會擾亂人體內(nèi) 激素平衡，導(dǎo)致肝中毒或其它重要組織器官發(fā)生生理病變，甚至具有潛在致癌作用。因此，歐美等多個國家將其列為水產(chǎn)養(yǎng)殖中的禁用藥物，我國農(nóng)業(yè)部在2002年頒布的235號公告 《動物性食品中獸藥最高殘留限量》將其列為獸藥殘留的重要檢測對象，規(guī)定在動物性食品的可食組織中不得檢出MT。
目前，檢測MT主要有高效液相色譜法(HPLC)，液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(LC-MS/MS)、 氣相色譜-質(zhì)譜法(GC-MS)和免疫分析法(IA)等。
CN201611161344.6提供一種檢測本發(fā)明的目的是提供一種檢測水產(chǎn)品中甲基睪酮的酶聯(lián)免疫試劑盒。本發(fā)明所提供的檢測水產(chǎn)品中甲基睪酮的酶聯(lián)免疫試劑盒，包括包被的水產(chǎn)品中甲基睪酮與載體蛋白的偶聯(lián)物，所述水產(chǎn)品中甲基睪酮的特異性抗體和酶標(biāo)二抗。為了更方便現(xiàn)場監(jiān)控和大量樣本篩查，所述試劑盒還包括A，B，C ，D，E，F(xiàn)試劑液、G試劑液、H試劑液、I試劑液、J試劑液、K試劑液。所述A，B，C，D，E，F(xiàn)試劑液為甲基睪酮系列濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液。本發(fā)明的檢測原理為將甲基睪酮與載體蛋白的偶聯(lián)物做包被原吸附于固相載體 上，加入樣品和特異性抗體，再加入酶標(biāo)二抗，待測樣品中殘留的甲基睪酮和固相載體上包 被的甲基睪酮與載體蛋白的偶聯(lián)物競爭結(jié)合特異性抗體，顯色后終止，測定樣品吸光值，該 值與樣品中甲基睪酮殘留物含量呈負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出甲基睪酮的含量。同 時根據(jù)酶標(biāo)板上的樣品顏色的深淺，與系列濃度的甲基睪酮標(biāo)準(zhǔn)溶液顏色的比較可判斷樣 品的濃度范圍。
•本發(fā)明主要采用間接競爭ELISA方法定性或定量檢測水產(chǎn)品中甲基睪酮的殘留 量；對樣品的前處理要求低，樣品前處理過程簡單，能同時快速檢測大批樣品；最低檢測限 達(dá)0.31 μg/L，可直接判斷樣品是否超標(biāo)，具有高特異性、高靈敏度、高精確度、高準(zhǔn)確度等特點，可在水產(chǎn)品中甲基睪酮殘留檢測中發(fā)揮重要作用。

制備

（1）3-位酮基保護(hù)
將4-雄烯二酮投入預(yù)先制備好的混合溶液中進(jìn)行醚化反應(yīng)，反應(yīng)完畢，將醚化反應(yīng)液加入到碳酸鹽的水溶液中，加畢繼續(xù)攪拌，抽濾，水洗得到醚化物濕料；
（2）17-位酮基格氏加成
將保護(hù)試劑加入甲苯中攪拌，投入上步反應(yīng)濕料脫水，然后與格氏試劑進(jìn)行格氏加成反應(yīng)；
（3）3-位酮基去保護(hù)和17β-位水解
格氏加成反應(yīng)結(jié)束，將用水稀釋的無機(jī)酸滴加入格氏加成反應(yīng)液中，加畢繼續(xù)水解保溫反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束，去除溶劑，抽濾、水洗、干燥、精制得到甲睪酮。

主要參考資料

[1] 內(nèi)科學(xué)•第二卷

[2] [中國發(fā)明] CN201611161344.6 一種檢測水產(chǎn)品中甲基睪酮的酶聯(lián)免疫試劑盒

[3] [中國發(fā)明] CN201510787680.0 一種甲睪酮的制備方法