背景[1-7]
Radixin Rabbit Monoclonal Antibody(Radixin兔單克隆抗體)是用Radixin抗原對家兔進(jìn)行免疫后篩選出只產(chǎn)生的Radixin抗體的B淋巴細(xì)胞，再將B細(xì)胞通過細(xì)胞融合技術(shù)與骨髓瘤雜交然后篩選出只分泌Radixin抗體的雜交細(xì)胞，最后通過層析柱純化制的高純度的Radixin抗體兔單克隆抗體。Radixin是一種細(xì)胞骨架蛋白，在將肌動蛋白與質(zhì)膜連接時可能很重要。
Radixin與ezrin和moesin的序列高度相似。radixin基因通過熒光原位雜交定位于11q23。表示假基因（RDXP2）的截斷版本被分配給Xp21.3。另一個似乎缺乏內(nèi)含子的假基因（RDXP1）通過Southern和PCR分析定位到11p。已發(fā)現(xiàn)編碼不同同種型的多個可變剪接的轉(zhuǎn)錄物變體用于該基因。ERM家族的細(xì)胞骨架蛋白，包括埃茲蛋白和moiesin。ERM蛋白似乎作為質(zhì)膜和基于肌動蛋白的細(xì)胞骨架之間的交聯(lián)劑起作用?？赡茉诩拥鞍捉z的帶刺末端與質(zhì)膜的結(jié)合中起關(guān)鍵作用。
Radixin是ERM（ezrin-radixin-moesin）家族的成員，在細(xì)胞運動，侵襲和腫瘤進(jìn)展中起重要作用。它在多種正常和腫瘤細(xì)胞中表達(dá)，包括許多類型的上皮和淋巴樣品。然而，它在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中的功能仍然難以捉摸。因此，在本研究中，首先在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞中檢測radixin基因表達(dá)，然后用慢病毒介導(dǎo)的短發(fā)夾RNA（shRNA）方法進(jìn)行抑制。發(fā)現(xiàn)在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤U251細(xì)胞中存在高水平的radixin表達(dá)。
Radixin shRNA引起radixin基因表達(dá)的下調(diào)，當(dāng)將radixin沉默的細(xì)胞植入裸鼠時，與空白對照細(xì)胞或無義shRNA細(xì)胞相比，腫瘤生長受到顯著抑制。此外，腫瘤中的微血管密度顯著降低。血小板反應(yīng)蛋白-1（TSP-1）和E-鈣粘蛋白在radixin抑制的膠質(zhì)母細(xì)胞瘤U251細(xì)胞中上調(diào)。相比之下，MMP9被下調(diào)。總之，研究結(jié)果表明，radixin參與GBM細(xì)胞遷移和侵襲，并暗示TSP-1，E-鈣粘蛋白和MMP9作為轉(zhuǎn)移誘導(dǎo)因子。
應(yīng)用[8][9]
Radixin兔單克隆抗體可用于Radixin介導(dǎo)的信號通路研究：
在Radixin表達(dá)下調(diào)對SGC-7901細(xì)胞中MRP2表達(dá)及外排功能的影響實驗中為了檢驗radixin在MRP2及MRP家族其他成員的表達(dá)及功能上的作用,ERM三個蛋白均表達(dá)的人胃癌SGC-7901細(xì)胞被選擇作為模型。本研究通過RNAi方法構(gòu)建radixin表達(dá)下調(diào)的穩(wěn)定細(xì)胞株,運用RT-PCR方法檢測了MRP1-6成員mRNA表達(dá)水平；實時熒光PCR和western結(jié)果表明radixin的表達(dá)下調(diào)使MRP2在mRNA和蛋白水平上的表達(dá)都下調(diào)了大約50%,并由此影響了SGC-7901中calcein的外排；MTT實驗結(jié)果表明radixin表達(dá)下調(diào)穩(wěn)定細(xì)胞克隆中calcein外排效率的降低并非由各細(xì)胞株活力的差異所導(dǎo)致。
綜上,在ERM三個蛋白共表達(dá)的體系中,radixin特異性調(diào)控MRP2的表達(dá)和功能。MRP蛋白家族是藥物轉(zhuǎn)運體家族的亞家族。MRP2是MRP蛋白家族的第二個成員,主要介導(dǎo)有機(jī)陰離子的主動轉(zhuǎn)運。藥物轉(zhuǎn)運體,作為一種特殊的膜蛋白家族,在藥物的吸收,分布與清除中發(fā)揮了重要的作用,藥物轉(zhuǎn)運體在腫瘤細(xì)胞中的過量表達(dá)所引起的多藥耐藥更是腫瘤治療失敗的主要原因。
因此,了解藥物轉(zhuǎn)運體蛋白表達(dá)功能的分子調(diào)控機(jī)制對藥代動力學(xué)研究及腫瘤臨床治療具有積極作用。MRP2是MRP蛋白家族的第二個成員,主要介導(dǎo)有機(jī)陰離子的主動轉(zhuǎn)運。有報道已證實ERM(ezrin/radixin/moesin)蛋白家族中的radixin參與了MRP2在肝細(xì)胞微管膜上定位的調(diào)控。然而有關(guān)兩者關(guān)系的報道主要集中在radixin對MRP2定位的調(diào)控上,鮮有關(guān)注到radixin對MRP2表達(dá)及功能的影響；并且大部分的研究都是在以肝細(xì)胞為代表的僅有radixin單獨表達(dá)的體系中進(jìn)行,甚少在ERM三個蛋白都存在的體系中。
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