腸激酶是存在于哺乳動物十二指腸內(nèi)的一種異源二聚體 (heterodimeric)絲氨酸蛋白酶，分子質(zhì)量為150 ku，由1條 115 ku重鏈和1條35 ku輕鏈組成，在pH 值為4.5～9.5、溫度4～45℃范圍內(nèi)特異性水解蛋白底物，商品化的腸激酶主要有兩種:天然提純的牛腸激酶和基因工程重組牛腸激酶。

基本介紹

由于經(jīng) EK裂解融蛋白所釋放的目的多肽具有和野生型完全一致的N-末端氨基酸序列，因而腸激酶可作為蛋白表達(dá)體系中融合蛋白的切割試劑。但是天然的腸激酶來源畢竟有限，并且提取分離的成本高，加之天然提取的腸激酶易為其它蛋向酶污染 ，造成切割融合蛋白的同時又降解了目的產(chǎn)物。而基因工程的方法正可以彌補(bǔ)這些不足，因而運(yùn)用基因工程的方法生產(chǎn)腸激酶廣為應(yīng)用。

圖1 商業(yè)化的腸激酶種類

結(jié)構(gòu)特性

天然腸激酶由1條結(jié)構(gòu)亞基(重鏈)和1條催化弧基(輕鏈)構(gòu)成，兩者通過1個分子間二硫鍵 結(jié)合，結(jié)構(gòu)亞基負(fù)責(zé)將催化亞基固定在小腸刷狀緣膜上并引導(dǎo)它向腸腔移動，催化亞基可 以特異性識別Asp-Asp-Asp-Asp-Iys序列，并沿序列的羧基端切下，將胰蛋白酶原活化為胰蛋白酶，從而啟動各種酶原活化的級聯(lián)。重組腸激酶 (recombinantEnterokinase，rEK)的分 子質(zhì)量L4通常為26.3ku，具有3個糖基化位點(diǎn)，其糖基化分子質(zhì)量大約為43ku。Vozza等發(fā)現(xiàn)，rEK體外實驗證明有全酶酶切特異性并且相較于天然腸激酶表現(xiàn)出對基因工程，融 合蛋白底物的酶切活性增強(qiáng)，因而現(xiàn)多采用基因工程的方法生產(chǎn)腸激酶。近年來所做的嘗 試多是克隆與表達(dá)235個氨基酸的輕鏈 (recombinantEnterokinaselightchain，rEK )。Janska等研究氨基末端殘基發(fā)現(xiàn)了EK輕鏈的三維結(jié)構(gòu)與類胰蛋白酶等的絲氨酸蛋白酶的 結(jié)構(gòu)同源性。[1]

參考文獻(xiàn)

[1] 張向輝,譚樹華,李泰明.腸激酶特點(diǎn)及其基因工程的研究進(jìn)展[J].藥物生物技術(shù),2005, 12:4.