原花青素是植物中廣泛存在的一類天然多酚類化合物的總稱。主要由兒茶素、表兒茶素、表兒茶素沒食子酸酯聚合而成，具有良好的抗氧化活性。已被廣泛運用在保健品、食品、化妝品等領(lǐng)域。原花青素B2是由2個表兒茶素聚合而成的二聚體，有研究表明，它是原花青素中抗氧化活性最強的單體，可作為衡量原花青素質(zhì)量的標志性成分。目前，原花青素的提取分離主要集中在葡萄籽中。而從油茶籽殼中提取分離原花青素B2，還未見相關(guān)報道。

提取方法

采用自有技術(shù)制備高純度原花青素B2。將油茶籽殼粉碎至60um過篩，在溫度67C、提取時間109min、體積分數(shù)65%乙醇、液料比19:1(mL/g)的條件下進行提取，提取濃縮后得到粗提液。

利用分子印跡技術(shù)對粗提液中的原花青素B2進行定向分離。將模板分子原花青素B2、硝酸鋁、2-乙烯基吡啶(摩爾比為1:3:8)加入溶劑中，超聲振蕩2h，使Al³⁺和原花青素B2充分配位。往溶液中加入交聯(lián)劑乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)和引發(fā)劑偶氮二環(huán)已基甲腈(ACCN)，超聲振蕩20min，充氮10min后真空密封，于60℃恒溫水浴熱引發(fā)聚合24h，得到印跡聚合物。聚合物烘干后研磨粉碎至75um過篩，于甲醇溶液中反復(fù)清洗除去過細顆粒。將得到的聚合物在索氏提取器中用乙酸和甲醇(體積比為9:1)混合溶液抽提，洗脫模板分子原花青素B2直至回流液高效液相色譜在波長280nm處檢測不到為止；然后用4mmol/L EDTA溶液洗滌除去殘留在聚合物中的Al³⁺，最后用水和甲醇重復(fù)洗滌至pH中性，放入真空干燥箱中干燥，得到原花青素B2-Al(III)分子印跡聚合物。將制得的原花青素B2-Al(III)分子印跡聚合物裝入固相萃取柱，加入甲醇溶液淋濕，并將原花青素粗提液上柱，吸附完畢后采用乙酸和甲醇(體積比為9:1)混合溶液洗脫，經(jīng)濃縮、干燥后得到原花青素B2產(chǎn)品，經(jīng)HPLC檢測原花青素B2質(zhì)量分數(shù)為97.2%。

檢測條件

采用RP-HPLC法檢測原花青素B2含量，具體條件：色譜柱Hypersil ODS2；流動相，甲醇:水:冰醋酸體積比95:3:2，梯度洗脫；流速，1mL/min；檢測波長，280nm；柱溫，35℃；進樣量，20uL。

穩(wěn)定性

光照會在一定程度上影響原花青素B2的穩(wěn)定性，尤其是紫外光條件下穩(wěn)定性急劇變差，原花青素B2在保存過程中應(yīng)注意避光；不同pH對原花青素B2的影響具有明顯的差別，在酸性條件下穩(wěn)定性明顯比在堿性條件下好，原花青素B2宜在酸性條件下保存；原花青素B2對溫度具有一定的敏感性，低溫情況下變化不大，在55℃以上穩(wěn)定性變差，在70℃以上穩(wěn)定性急劇變差，原花青素B2應(yīng)儲藏在40℃以下為宜；金屬離子的存在對原花青素B2穩(wěn)定性都有一定程度的影響，在保存過程中應(yīng)該避免接觸金屬離子，尤其是Cu²⁺、Ca²⁺、Zn²⁺；檸檬酸和維生素C能在一定程度增強原花青素B2的穩(wěn)定性，而山梨酸鉀和亞硫酸鈉則會降低原花青素B2的穩(wěn)定性，建議保存過程中添加質(zhì)量分數(shù)0.2%的檸檬酸或維生素C。

參考文獻

[1]熊偉,付建平,韓曉丹,等. 油茶籽殼中原花青素B2穩(wěn)定性的研究[J]. 糧食與油脂,2021,34(12):142-144,149. DOI:10.3969/j.issn.1008-9578.2021.12.033.