簡(jiǎn)述

(-)-表沒食子兒茶素是一種化學(xué)式為C₁₅H₁₄O₇，分子量為306.267的有機(jī)物，縮略表達(dá)為EGC，是一種多酚化合物，天然存在于山茶科植物茶的干葉中，是綠茶提取物中生理活性物質(zhì)的主體。常溫常壓下，(-)-表沒食子兒茶素的性狀為白色粉末，相對(duì)密度為1.695 g/cm³。

生理活性

采用連續(xù)飼喂(-)-表沒食子兒茶素30 d研究其對(duì)高脂大鼠的血脂調(diào)節(jié)作用。結(jié)果表明，大鼠血清中總膽固醇，高密度脂蛋白膽固孵和低密度脂蛋白膽固醇含量與對(duì)照均無(wú)顯著性差異，甘油三酯含量與對(duì)照有極顯著性差異，(-)-表沒食子兒茶素具有一定的降血脂作用[1]。

實(shí)驗(yàn)探究(-)-表沒食子兒茶素對(duì)體外培養(yǎng)的人大腸癌LoVo細(xì)胞株生長(zhǎng)周期的影響以及誘導(dǎo)該細(xì)胞凋亡的作用。 用流式細(xì)胞術(shù)，瓊脂糖凝膠電泳，HE染色觀察(-)-表沒食子兒茶素處理LoVo細(xì)胞后其細(xì)胞周期的改變以及細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)和生化方面的改變。結(jié)果， (-)-表沒食子兒茶素在低濃度時(shí)對(duì)LoVo細(xì)胞的周期有明顯的影響，主要是S期和M/G2期明顯降低，引起LoVo細(xì)胞生長(zhǎng)阻滯在G1期[2]。

提取方法

方法一

將茶葉進(jìn)行提取，過濾，水洗，回收，過濾，樹脂吸附，濃縮，結(jié)晶，離心，微波干燥，除鐵后得到高含量的(-)-表沒食子兒茶素產(chǎn)品。該制備方法具有操作簡(jiǎn)單，分離效率高，生產(chǎn)成本低，生產(chǎn)周期短，產(chǎn)品純度高的優(yōu)點(diǎn)，適用于工廠化大規(guī)模生產(chǎn)[3]。

方法二

以綠茶提取物為原料，經(jīng)過單寧酶酶解，吸附樹脂柱色譜吸附后以含水乙醇洗脫，收集富含(-)-表沒食子兒茶素解吸餾分，高效外循環(huán)濃縮回收乙醇，再用反滲透膜低溫濃縮，結(jié)晶處理，最終冷凍干燥得到高純度的(-)-表沒食子兒茶素單體。本發(fā)明方法簡(jiǎn)便，單體提取率及產(chǎn)品純度高，制備周期短，成本低，適宜規(guī)模型工業(yè)化生產(chǎn)[4]。

含量測(cè)定

采用HPLC法，以表沒食子基兒茶素沒食子酸酯(EGCG)為對(duì)照品，外標(biāo)法測(cè)定其在茶多酚提取物中的量，并分別測(cè)定EGCG與(-)-表沒食子兒茶素(EGC)，兒茶素(C)，表兒茶素(EC)，沒食子基兒茶素沒食子酸酯(GCG)和沒食子酰表兒茶素(ECG)的相對(duì)校正因子，用獲得的相對(duì)校正因子計(jì)算后5種成分的量，實(shí)現(xiàn)一測(cè)多評(píng)。同時(shí)，用外標(biāo)法測(cè)茶多酚提取物中EGC，C，EC，GCG和ECG的量。向量夾角余弦法分析，表明外標(biāo)法的測(cè)定值與采用相對(duì)校正因子的計(jì)算值之間無(wú)顯著性差異，說明一測(cè)多評(píng)法可以應(yīng)用于茶多酚提取物及其制劑的多指標(biāo)質(zhì)量評(píng)價(jià)[5]。

應(yīng)用與研究

(-)-表沒食子兒茶素常用于分析含量鑒定/測(cè)定，藥理活性篩選。文獻(xiàn)報(bào)道了一種基于(-)-表沒食子兒茶素濃度差異的茶樹嫩葉識(shí)別方法，包括以下步驟：(1)針對(duì)茶樹鮮葉獲取其特征波段處的反射率；(2)基于茶葉中的(-)-表沒食子兒茶素(以下簡(jiǎn)稱EGC)濃度與特征波段反射率的關(guān)系式，獲取所述茶樹鮮葉的EGC濃度；(3)基于茶樹嫩葉的EGC濃度閾值，對(duì)所述茶樹鮮葉進(jìn)行嫩葉識(shí)別。上述基于EGC濃度差異析的茶樹嫩葉識(shí)別方法，能對(duì)茶樹的老葉和鮮葉進(jìn)行識(shí)別，準(zhǔn)確度高，抗干擾能力強(qiáng)，適應(yīng)性好[6]。

為了研究白茶萎凋過程中茶多酚、兒茶素組分含量變化與其合成途徑中關(guān)鍵酶基因的動(dòng)態(tài)表達(dá)，為優(yōu)化白茶的萎凋工藝提供參考依據(jù)。以不同萎凋階段的白茶為原料，分別采用福林酚(Folin-Ciocalten)比色法和高效液相色譜法(HPLC)測(cè)定茶多酚、兒茶素組分含量的變化，并以實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)白茶萎凋過程中與兒茶素物質(zhì)代謝合成相關(guān)基因(PAL、C4H、CHS、CHI、F3'5'H、F3'H、F3H、DFR、LAR、ANS、ANR和UGGT)的相對(duì)表達(dá)量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，白茶萎凋過程中茶多酚含量呈逐漸降低趨勢(shì)，兒茶素組分中表兒茶素(EC)、沒食子兒茶素(GC)、(-)-表沒食子兒茶素(EGC)、表兒茶素沒食子酸酯(ECG)含量整體上呈先上升后下降的變化趨勢(shì)，且均在萎凋歷時(shí)32 h出現(xiàn)最大值。實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果表明，兒茶素生物合成途徑關(guān)鍵酶基因PAL、C4H、CHI、F3H、F3'H、F3'5'H、DFR、LAR、ANR和UGGT均在萎凋歷時(shí)32 h呈上調(diào)表達(dá)，CHS基因則隨萎凋歷時(shí)的增加呈下調(diào)表達(dá)趨勢(shì)，ANS基因表達(dá)在整個(gè)萎凋過程中呈先上升后下降的變化趨勢(shì)，在萎凋歷時(shí)16 h達(dá)最大值。白茶萎凋過程中兒茶素合成途徑關(guān)鍵基因表達(dá)水平具有調(diào)控兒茶素生物合成的作用。最后得出結(jié)論，在白茶萎凋過程中，兒茶素生物合成途徑關(guān)鍵酶基因PAL、C4H、F3H、F3'H、DFR、LAR、ANR的表達(dá)與兒茶素組分單體EC、GC、EGC的積累規(guī)律基本一致，其最大值均出現(xiàn)在萎凋歷時(shí)32 h，因此在制茶時(shí)可適當(dāng)縮短萎凋時(shí)長(zhǎng)，以提高白茶品質(zhì)[7]。

參考文獻(xiàn)

[1]李鋒,王賢波.茶葉中EGC對(duì)高脂大鼠的降血脂作用[J].浙江農(nóng)業(yè)科學(xué), 2012(1):3.DOI:10.3969/j.issn.0528-9017.2012.01.013.

[2]譚曉華,張亞歷.表沒食子兒茶素對(duì)LoVo細(xì)胞生長(zhǎng)周期的影響和誘導(dǎo)其凋亡的研究[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào), 1999, 15(1):56-59.DOI:10.3321/j.issn:1001-1978.1999.01.018.

[3]顧峰.一種茶葉中EGC兒茶素的提取方法:CN201811536009.9[P].CN109354585A.

[4]張盛,劉仲華,肖文軍,等.表沒食子兒茶素(EGC)單體的分離純化方法:CN201110353889.8[P].

[5]謝靜,熊靜,宋麗,等.一測(cè)多評(píng)法測(cè)定茶多酚中6種兒茶素類含量[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā), 2016, 28(10):5.DOI:CNKI:SUN:TRCW.0.2016-10-013.

[6]李曉麗,魏玉震,何勇.一種基于EGC濃度差異的茶樹嫩葉識(shí)別方法:CN201710016756.9[P].CN106908417A.

[7]陳靜,俞瀅,張丹丹,等.白茶萎凋過程中兒茶素合成關(guān)鍵酶基因表達(dá)分析[J].南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào), 2016.