簡介
星孢菌素(也稱為抗生素AM-2282)最初是從鏈霉菌Streptomyces staurosporeus中分離的天然生物堿,溶于DMSO和甲醇,它由氨基己糖和吲哚咔唑核心構成。星孢菌素常被用作蛋白激酶C的有效抑制劑,抑制PKCα (IC50=2nM)、PKCγ(IC50=5nM)和 PKCη (IC50=4nM)。因星孢菌素是廣譜抑制劑,因此可以抑制很多其他蛋白激酶如PKA(IC50=7nM)、p60v-src酪氨酸蛋白激酶(IC50=6nM) 、PKG(IC50=8.5nM)、鈣調(diào)蛋白激酶II(IC50=20nM)及肌球蛋白輕鏈激酶(IC50=1.3nM),其作用靶點是肌球蛋白輕鏈激酶、蛋白激酶C并將正常細胞的細胞周期阻滯于G1期檢查點。該藥物有松弛平滑肌、細胞毒性和調(diào)節(jié)eNOS基因表達、誘導細胞凋亡如人神經(jīng)母細胞瘤細胞系和雞胚胎神經(jīng)元細胞等作用[1]。
作用機制
星孢菌素抑制肌動蛋白平滑肌收縮的作用機制大致如下,即細胞收縮主要由肌動蛋白和肌球蛋白形成橫橋后介導。肌球蛋白輕鏈激酶(MLCK)是細胞收縮的關鍵分子。MLCK有C端肌球蛋白區(qū)、N端肌動蛋白區(qū)、中心處的激酶區(qū)和鈣調(diào)蛋白(CAM)區(qū)。肌球蛋白輕鏈的磷酸化會誘發(fā)肌動蛋白和肌球蛋白分子之間的相互作用。MLCK與肌球蛋白輕鏈磷酸酶(MLCPh)之間的平衡決定肌球蛋白輕鏈(MLC)的磷酸化[1]。
提取方法
(1)向星孢菌素發(fā)酵液中加入3%珍珠巖(按發(fā)酵液體積計,Kg/L),攪拌30±5min,板框過濾,濾液排放至污水處理站,濾餅用壓縮空氣吹干2±0.5h,收集菌渣;
(2)將菌渣用有機溶劑提取3次,每次加入4倍體積(L/Kg菌渣)的溶劑,過濾,合并濾液;
(3)濾液在一定溫度下減壓濃縮至原體積的1/30,加入等體積的溶劑、等體積的水溶液,1/3體積的萃取助劑,攪拌30±10min,靜置60±10min,分液,水相再用原體積溶劑萃取一次,合并有機層,加入5%(Kg/L)無水硫酸鈉,攪拌干燥60±10min,過濾;
(4)濾液在35±5℃下減壓濃縮至原體積的1/20~1/16,加入2倍體積的解析溶劑,常溫攪拌60±10min,過濾,得星孢菌素粗品;
(5)將星孢菌素粗品用溶劑A與溶劑B體積比為88:12~94:6的混合溶劑溶解,混合溶劑體積(L)為星孢菌素質(zhì)量(Kg)的15倍,溶解后用0.22μm的濾膜過濾。濾液在一定溫度下減壓濃縮至原體積的1/6,加入等體積的溶劑B,攪拌60±10min,過濾,得星孢菌素一次結晶品,按照此方法再結晶一次,得二次結晶品;
(6)星孢菌素二次結晶品在60±5℃真空干燥16±2h,粉碎,得星孢菌素成品[2]。
參考文獻
[1]羅銀月. 星孢菌素對山羊顳下頜關節(jié)盤細胞胞外基質(zhì)及肌動蛋白骨架的影響[D]. 甘肅:蘭州大學,2018. DOI:10.7666/d.D01451189.
[2]湖北宏中藥業(yè)股份有限公司. 一種星孢菌素提取方法:CN201911129828.6[P]. 2020-12-22.