喜樹(shù)堿，是1966年由美國(guó)學(xué)者從我國(guó)特有樹(shù)種喜樹(shù)(Camptothecaacuminata)中提取得到的具有廣譜抗腫瘤活性的生物堿，并由此而命名。10-羥基喜樹(shù)堿是喜樹(shù)堿的天然衍生物，是我國(guó)廣泛臨床用的抗腫瘤藥物。此外，喜樹(shù)堿和10-羥基喜樹(shù)堿是目前已獲美國(guó)食品及藥品管理局(FDA)批準(zhǔn)臨床應(yīng)用的喜樹(shù)堿類抗腫瘤藥物CPT-11(Irinotecan，用于治療直腸/結(jié)腸癌)、TPT(Topotecan，用于治療卵巢癌)的半合成前體化合物。
傳統(tǒng)生產(chǎn)方法
目前，喜樹(shù)堿一般從喜樹(shù)中提取得到，10-羥基喜樹(shù)堿主要經(jīng)由喜樹(shù)堿生物合成制備。
國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局專利局于1996年5月8日公開(kāi)了一種喜樹(shù)堿的提取方法，該發(fā)明專利是以喜樹(shù)的果實(shí)或根皮為原料提取喜樹(shù)堿。它采用磨粉→水煮→煮液濃縮→膏狀物→乙醇分離樹(shù)膠雜質(zhì)→析出粗品→氯仿混合液多次重結(jié)晶得到產(chǎn)品的工藝路線。
1999年12月22日，國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局專利局公開(kāi)了一種喜樹(shù)堿的生產(chǎn)方法，該發(fā)明專利以喜樹(shù)葉為主要原料，果實(shí)為輔助原料生產(chǎn)喜樹(shù)堿。它采用原料粉碎→乙醇滲漉→超臨界二氧化碳萃取剩余物質(zhì)→濃縮滲漉液和萃取液→大孔吸附樹(shù)脂柱層析→重結(jié)晶后得到產(chǎn)品的工藝路線。
2000年4月26日又公開(kāi)了另外一種喜樹(shù)堿的生產(chǎn)方法，該發(fā)明專利涉及一種以喜樹(shù)葉及果實(shí)為原料，生產(chǎn)喜樹(shù)堿的工藝方法。它采用原料粉碎→乙醇及水滲漉→濃縮滲漉液→大孔吸附樹(shù)脂柱層析→重結(jié)晶后得到產(chǎn)品的工藝路線。
上述三種方法在以喜樹(shù)果實(shí)為原料生產(chǎn)喜樹(shù)堿時(shí)，均未考慮到原料中尚含有10-羥基喜樹(shù)堿(含量約為喜樹(shù)堿的10％)，提取純化后所得產(chǎn)品可創(chuàng)造相當(dāng)于喜樹(shù)堿產(chǎn)品的產(chǎn)值(10-羥基喜樹(shù)堿價(jià)格為喜樹(shù)堿的10倍以上)，因而造成了10-羥基喜樹(shù)堿資源的浪費(fèi)。
技術(shù)內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種以2～40天的喜樹(shù)幼苗或喜樹(shù)果實(shí)為原料，產(chǎn)品得率高、生產(chǎn)成本低的喜樹(shù)堿、10-羥基喜樹(shù)堿的生產(chǎn)工藝方法。
為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明以2～40天的喜樹(shù)幼苗或喜樹(shù)果實(shí)為原料經(jīng)粉碎→乙醇滲漉萃取→萃取液濃縮至濃水溶液→大孔吸附樹(shù)脂柱層析→不同溶劑解吸液濃縮分別得喜樹(shù)堿、10-羥基喜樹(shù)堿粗品→分別重結(jié)晶后得喜樹(shù)堿、10-羥基喜樹(shù)堿的工藝路線。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是
1、2～40天的喜樹(shù)幼苗中10-羥基喜樹(shù)堿含量可與喜樹(shù)堿含量相當(dāng)。以2～40天的喜樹(shù)幼苗為原料生產(chǎn)喜樹(shù)堿、10-羥基喜樹(shù)堿，產(chǎn)品得率高，生產(chǎn)成本低，經(jīng)濟(jì)效益十分可觀。
2、以喜樹(shù)果實(shí)為原料生產(chǎn)喜樹(shù)堿、10-羥基喜樹(shù)堿，可避免資源浪費(fèi)。
3、本發(fā)明以2～40天喜樹(shù)幼苗為原料，喜樹(shù)堿產(chǎn)品收率為0.4‰，10-羥基喜樹(shù)堿產(chǎn)品收率為0.2‰；以喜樹(shù)果實(shí)為原料，喜樹(shù)堿產(chǎn)品收率為0.3‰，10-羥基喜樹(shù)堿產(chǎn)品收率為0.02‰。
4、本發(fā)明的喜樹(shù)堿產(chǎn)品純度可超過(guò)97.5％，10-羥基喜樹(shù)堿產(chǎn)品純度可達(dá)90％。
5、本發(fā)明在生產(chǎn)過(guò)程中不使用毒性高的氯仿和甲醇，環(huán)境污染小，對(duì)生產(chǎn)人員的毒害小。
具體實(shí)施
將發(fā)芽2～40天的喜樹(shù)幼苗去除果皮后60～80℃烘干24小時(shí)，粉碎至20目。取10千克喜樹(shù)幼苗粉經(jīng)7倍體積60％乙醇滲漉萃取后，將所得萃取液濃縮至原體積的1/4。濃縮液直接通過(guò)惰性大孔吸附樹(shù)脂柱進(jìn)行吸附，吸附后用蒸餾水洗滌至基本無(wú)色，以20倍柱體積乙酸乙酯解吸后，再以20倍柱體積乙酸乙酯/乙醇(體積比1∶1)。分別收集合并乙酸乙酯解吸液及乙酸乙酯/乙醇解吸液，濃縮后分別析出喜樹(shù)堿、10-羥基喜樹(shù)堿粗品，最后分別經(jīng)乙酸乙酯/乙醇(體積比1∶1)重結(jié)晶得到喜樹(shù)堿產(chǎn)品4克(得率為0.4‰)、10-羥基喜樹(shù)堿產(chǎn)品2克(得率為0.2‰)。