背景技術(shù)

利福霉素鈉為半合成利福霉素類中的廣譜抗菌藥，對(duì)金黃色葡萄球菌，結(jié)核桿菌有較強(qiáng)的抗菌作用。因?yàn)榭股胤肿咏Y(jié)構(gòu)、組分比較復(fù)雜，而采用抗生素微生物檢定法的測(cè)定結(jié)果比較直觀，所以微生物檢定法仍是抗生素含量測(cè)定的首選方法。但是對(duì)于其方法學(xué)考究的文獻(xiàn)報(bào)道仍較少，所以對(duì)其方法進(jìn)行方法學(xué)考究有其必要性。因此，本文采用微生物法對(duì)利福霉素鈉注射液的含量進(jìn)行測(cè)定，并對(duì)其方法學(xué)進(jìn)行考察，為微生物檢定法的方法學(xué)建立及驗(yàn)證提供參考。

檢測(cè)方法

1、標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

精密稱定利福霉素鈉對(duì)照品，用滅菌蒸餾水稀釋至每毫升約含1000ul的溶液，再用滅菌的pH6.0的磷酸鹽緩沖液稀釋成0.1、0.25、0.5、1.0、1.2μ·mL^-1的濃度。取已制備的雙碟10只，每2只為一個(gè)濃度，于每只雙碟之4個(gè)不銹鋼小管內(nèi)滴加上述溶液。測(cè)定菌為藤黃微球菌〔MCC（B）28001〕，使用培養(yǎng)基Ⅱ（pH6.5~6.6），緩沖液為滅菌的pH6.0磷酸鹽緩沖液，在35~37℃條件下培養(yǎng)16~18h。將所得的抑菌圈直徑(Y)對(duì)利福霉素鈉溶液濃度（C)的對(duì)數(shù)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為Y=9.0113logC+20.884，r=0.9981(n=5)，在0.1u·mL^-1～1.2μ·mL^-1范圍內(nèi)抑菌圈直徑與利福霉素鈉濃度的對(duì)數(shù)值呈良好的線性關(guān)系。

2、空白輔料的干擾

按處方比例精密量取空白輔料液0.8mL，用滅菌蒸餾水稀釋至50mL，再精密量取5mL，用滅菌的磷酸鹽緩沖液稀釋至50mL，得空白輔料溶液，所配空白溶液與含藥溶液具有相同的輔料量。將空白輔料溶液按上述方法進(jìn)行點(diǎn)樣培養(yǎng)，未見(jiàn)有抑菌圈出現(xiàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，空白輔料對(duì)微生物法測(cè)定利福霉素含量不產(chǎn)生影響。

3、劑間比的驗(yàn)證

將利福霉素鈉對(duì)照品制成高濃度1.0u·mL^-1和低濃度0.5μ·mL^-1（2：1），按項(xiàng)1方法進(jìn)行試驗(yàn)。根據(jù)微生物檢定法中雙碟的制備所規(guī)定的高濃度所致的抑菌圈直徑范圍(18mm~22mm），高濃度所致的抑菌圈直徑為20.23mm，高低濃度所致抑菌圈直徑差為2.12mm。符合規(guī)定中高濃度所致的抑菌圈直徑范圍，且高低濃度所致抑菌圈直徑大小可以區(qū)分。

4、回收率試驗(yàn)

將一定量的藥物與輔料按處方比例，分別配成標(biāo)示量為80%、100%、120%的利福霉素鈉注射液，每批約100支，每個(gè)劑量取3份樣品，按照微生物效價(jià)二劑量法測(cè)定，實(shí)驗(yàn)結(jié)果平均回收率為100.1%，RSD為0.87%(n=9)，符合微生物檢定法的準(zhǔn)確度要求。

5、精密度試驗(yàn)

取同一批號(hào)的利福霉素鈉注射液，照1項(xiàng)下方法，進(jìn)行6次含量測(cè)定，結(jié)果RSD為0.91%，表明本方法具有良好的重復(fù)性。

6、樣品的含量測(cè)定

取利福霉素鈉注射液樣品，加滅菌水制成1000μ·mL^-1的利福霉素鈉溶液，再用pH6.0磷酸鹽滅菌緩沖液稀釋成1.0μ·mL^-1和0.5μ·mL^-1的溶液。另取利福霉素鈉標(biāo)準(zhǔn)品，同法配制。按抗生素生物二劑量法測(cè)定，可信限不得大于7%。結(jié)果顯示可信限均小于7%。

參考文獻(xiàn)

[1]陳穎,周麗梅,楊帆. 微生物法測(cè)定利福霉素鈉注射液含量的方法學(xué)驗(yàn)證[J]. 海峽藥學(xué),2008,20(5):44-46. DOI:10.3969/j.issn.1006-3765.2008.05.024.