背景及概述^[1]

白首烏系蘿藦科鵝絨藤屬植物耳葉牛皮消(Cynanchumauriculatum Royle ex Wight)的干燥塊根，是傳統(tǒng)的補益中藥。研究表明，C-21 甾體苷是白首烏的主要活性成分，具有調(diào)節(jié)免疫、保護肝臟、神經(jīng)和胃腸道細胞等藥理作用。近來的研究還表明白首烏C-21 甾體苷類成分具有顯著的抗腫瘤作用。已有多種具有抗腫瘤作用的C-21 甾體苷類化合物從白首烏中分離得到。其中，告達庭是從白首烏中分離得到的一種C-21 甾體苷元。近期有研究報道告達庭對人胃癌、結(jié)腸癌、肺癌等多種人源性腫瘤細胞株的生長具有抑制作用。

應(yīng)用 ^[1-5]

告達庭對人胃癌、結(jié)腸癌、肺癌等多種人源性腫瘤細胞株的生長具有抑制作用。

1）告達庭激活Caspase-3 誘導人胃癌細胞SGC-7901 凋亡：告達庭是從白首烏中分離得到的一種具有較高活性的成分的C-21 甾體苷元，有報道其有抑制消化道腫瘤細胞增殖的作用。實驗結(jié)果證實告達庭呈劑量、時間依賴性地抑制人胃癌細胞SGC-7901 細胞的生長并能誘導細胞凋亡，使細胞凋亡率增高并出現(xiàn)染色體濃聚等典型的凋亡形態(tài)學變化。細胞凋亡主要存在兩條通路：線粒體通路和死亡受體通路，兩條途徑都是一系列高度調(diào)控的半胱氨酸蛋白酶Caspase 級聯(lián)反應(yīng)(cascade)事件的結(jié)果，Caspase-3 被證實處于該級聯(lián)反應(yīng)的下游，它通過降解細胞內(nèi)相應(yīng)底物使細胞死亡，在細胞凋亡中起著不可替代的作用。以往文獻報道告達庭作用肝癌細胞24h 時能明顯激活Caspase-3， 通過Caspase途徑誘導腫瘤細胞凋亡。因此本實驗選擇相同時間點對告達庭作用胃癌細胞SGC-7901 的Caspase-3 蛋白表達量和活性進行了檢測，結(jié)果表明告達庭70 μM 能明顯增加剪切型Caspase-3 蛋白（19kD 和17kD）的表達，并使蛋白活性顯著增高。綜上，實驗結(jié)果表明告達庭具有抑制胃癌細胞SGC-7901 增殖和誘導胃癌細胞發(fā)生凋亡的作用，其機制是通過激活Caspase-3 級聯(lián)反應(yīng)誘導胃癌細胞的凋亡。

2）告達庭增強TRAIL誘導的HepG2細胞凋亡。采用MTT法和細胞集落形成實驗檢測告達庭與TRAIL聯(lián)合對細胞增殖的影響；TUNEL染色法檢測細胞凋亡的變化；免疫印跡實驗分析蛋白的表達水平。結(jié)果顯示告達庭與TRAIL聯(lián)合作用Hep G2細胞24 h后，細胞活力明顯下降，細胞增殖受到抑制；同時，兩者聯(lián)用后細胞凋亡數(shù)目明顯增加，顯著高于告達庭和TRAIL單用誘導的細胞凋亡率；與對照相比，告達庭與TRAIL聯(lián)用促進了caspase-3、caspase-7、caspase-9和PARP的活性切割，而凋亡抑制蛋白survivin的表達則下調(diào)。因此告達庭能夠增強TRAIL誘導Hep G2細胞凋亡，其機制可能與激活caspase家族因子的活性切割和抑制survivin的表達相關(guān)。

3）告達庭下調(diào)β-catenin/survivin抑制神經(jīng)膠質(zhì)瘤C6細胞遷移。MTT法檢測告達庭對C6細胞存活力的影響；流式細胞術(shù)檢測細胞周期的變化；細胞劃痕實驗及Transwell遷移小室檢測告達庭對C6細胞體外遷移能力的抑制作用；免疫印跡實驗檢測告達庭對C6細胞內(nèi)β-catenin、Survivin以及細胞周期相關(guān)蛋白CyclinD1和Cdk4蛋白表達的影響。結(jié)果顯示告達庭能夠劑量依賴性地抑制C6細胞的增殖并阻滯細胞于G1期，其機制與下調(diào)細胞周期素CyclinD1和Cdk4的表達相關(guān)；告達庭給藥后，C6細胞的遷移能力明顯受到抑制，同時β-catenin及其下游因子Survivin的表達呈顯著下降趨勢。因此告達庭具有抑制C6細胞的增殖和體外遷移能力的作用，其機制可能與抑制β-catenin蛋白及Survivin的表達相關(guān)。

4）告達庭能逆轉(zhuǎn)HGF誘導的PC-9細胞對吉非替尼的耐藥。利用外源性HGF及與MRC-5共培養(yǎng)誘導PC-9細胞對EGFR-TKIs耐藥模型；MTT法考察告達庭對HGF誘導的PC-9細胞耐吉非替尼的逆轉(zhuǎn)作用；Western blot檢測告達庭聯(lián)合吉非替尼逆轉(zhuǎn)HGF誘導PC-9細胞耐藥的機制。結(jié)果顯示外源性HGF和MRC-5均可誘導PC-9對吉非替尼的耐藥作用，降低相對抑制率(P<0.05)；在HGF存在的情況下，單用告達庭(0~32μM)和吉非替尼(1μM)均不能顯著抑制PC-9的增殖，而告達庭聯(lián)合吉非替尼能劑量依賴性抑制PC-9增殖(P<0.05)。告達庭聯(lián)合吉非替尼下調(diào)Met及PI3K/AKT磷酸化水平(P<0.05)。因此告達庭能逆轉(zhuǎn)HGF誘導的PC-9細胞對吉非替尼的耐藥，其機制可能與其抑制Met/PI3K/AKT通路有關(guān)。

5）此外，告達庭還可用于制備一種乙酰水楊酸告達庭酯類衍生化合物，該方法包括在脫水劑的作用下，使告達庭與醛或酮類進行反應(yīng)，生成8，14-O-異亞烷基告達庭；再在催化劑的作用下，使其與乙酰水楊酸衍生物反應(yīng)，結(jié)束后，在酸性條件下脫去保護基，得到最終產(chǎn)物乙酰水楊酸告達庭酯類衍生化合物。上述化合物具有雙重靶向作用于腫瘤細胞，實現(xiàn)更好的抗腫瘤效果，且具有原料易得，工藝簡單和易于操作的優(yōu)點，能夠用于抗腫瘤藥物。

主要參考資料

[1] 告達庭激活Caspase-3誘導人胃癌細胞SGC-7901 凋亡

[2] 告達庭增強TRAIL誘導的HepG2細胞凋亡

[3] 告達庭下調(diào)β-catenin/survivin抑制神經(jīng)膠質(zhì)瘤C6細胞遷移實驗研究

[4] CN201510079985.6一種乙酰水楊酸告達庭酯類衍生化合物及其制備方法和應(yīng)用

[5] 告達庭聯(lián)合吉非替尼逆轉(zhuǎn)HGF誘導的非小細胞肺癌對EGFR-TKI的獲得性耐藥研究