概述^[1]

此試劑提供了進行簡便、靈敏和防污染的 PCR 檢測系統(tǒng)。 核心試劑包含了化學修飾熱啟動酶（Hotstart HiTaq DNA polymerase）、UDG 酶（Uracil-DNA Glycosylase）、MgCl2 溶液、經過優(yōu)化的緩沖液和優(yōu)化比例的 dUTP/dNTP Mix， 使用者只需加入適量的引物和探針或熒光染料，即可進行熒 光 PCR 檢測。在 PCR 反應前加入 UDG 可降解含有尿嘧啶 的 PCR 產物，而對不含尿嘧啶的模板無任何影響。在反應 中 Hotstart HiTaq DNA polymerase 的加入使得反應具有極 強的特異性和高度靈敏度。

UDG 的作用原理：在 PCR 反應前 50°C、2 min 反應中，UDG 酶可水解 PCR 反應液中含有尿嘧啶的 PCR 產物的尿 嘧啶堿基和糖磷酸骨架的 N-糖苷鍵，釋放游離尿嘧啶。隨后 進行 95°C、10 min 熱處理，在 UDG 酶失活的同時進一步 對磷酸骨架水解，從而消除含有尿嘧啶的 PCR 產物的污染。 UDG 酶可以作用于單鏈或雙鏈 DNA，對 RNA 無活性。

組成成分

操作流程

 1. PCR 反應體系的設置：

1) 溶解并混勻 PCR 反應所需的各種溶液。并放置于冰浴 上或冰盒內。建議反應 PCR 液體分裝使用，避免反復凍融。

2) 參考下表設置的反應,建議 PCR 反應體系的配置在冰浴或在冰盒上進行。

3) 用移液器輕輕吹打混勻或輕微 Vortex 混勻，室溫離心 數(shù)秒，使液體積聚于管底。

4) 各設置好的 PCR 反應管置于 PCR 儀上，開始 PCR 反 應。

2. PCR 反應參數(shù)的設置：

保存方法

 -15°C 到 -25°C 保存，有效期見包裝。

參考文獻

化學修飾熱啟動酶防污染Mix產品說明書