概述^【1】

磷脂酰乙醇胺(phosphatidylerhanolamine，PE)又稱腦磷脂，天然的磷脂酰乙醇胺是從動(dòng)物腦組織或脊髓中用溶劑提取、精制而得；合成的磷脂酰乙醇胺是甘油單磷酸二脂肪酸酯與乙醇胺反應(yīng)而得。目前尚無(wú)藥典收載，我國(guó)生化試劑標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表4—1—5。

藥物制劑中的應(yīng)用^【1】

磷脂酰乙醇胺在藥劑中主要用作乳化劑和脂質(zhì)體載體材料，用于制造乳劑和脂質(zhì)體。此外，其還具有抗氧化作用，但由于價(jià)格較貴，故很少被用作抗氧劑。

磷脂酰乙醇胺的生物合成^【2】

磷脂酰乙醇胺的生物臺(tái)成是從乙醇胺開(kāi)始的．其+系列合成過(guò)程與磷脂酰腮堿的合成過(guò)程相對(duì)應(yīng)．所不同的是各步反應(yīng)所需的酶分別作相應(yīng)的變化，由乙醇胺激酶(胞質(zhì))、CTP一磷酸乙醇胺胞苷酰轉(zhuǎn)移酶(胞質(zhì))、CDP乙醇胺一1，2-二?；?lsquo;油磷酸乙醇胺轉(zhuǎn)移酶(內(nèi)質(zhì)網(wǎng))催化(圖9．7)。

目前．有關(guān)究竟是什么物質(zhì)調(diào)節(jié)二二?；?油生成磷脂酰胚堿、磷脂酰乙醇胺或三?；视瓦€沒(méi)有完全搞清楚。在肝細(xì)胞、酵母菌和某些細(xì)菌中發(fā)現(xiàn)存在著·條磷脂酰乙醇胺轉(zhuǎn)換為磷脂酰膽堿的路線，在這條包括三個(gè)連續(xù)反應(yīng)的路線中，甲基從S一腺苷甲硫氨酸(AdoMet)被轉(zhuǎn)移到磷脂酰乙醇胺上，該轉(zhuǎn)移過(guò)程是在位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的磷脂酰乙醇胺一N一甲基轉(zhuǎn)移酶的催化下進(jìn)行的。通過(guò)磷脂酰乙醇胺的甲基化，肝細(xì)胞實(shí)現(xiàn)磷脂酰膽堿與磷脂酰乙醇胺問(wèn)的相互轉(zhuǎn)化，并間接地產(chǎn)生膽堿。

在真核細(xì)胞中余下的四個(gè)主要磷脂由CDP二?；视秃铣?，其反應(yīng)方式與磷脂酰膽堿和磷脂酰乙醇胺的合成反應(yīng)相似，如磷脂酰絲氨酸可通過(guò)由磷脂酰絲氨酸合成酶催化的CDP二?；视团c絲氨酸的反應(yīng)得到，或由磷脂酰乙醇胺通過(guò)與絲氨酸的堿基交換反應(yīng)得到，磷脂酰肌醇則可通過(guò)由磷脂酰肌醇合成酶催化的CDP二：?；视团cL一肌醇的反應(yīng)得到等。

分離^【3】

單磷脂的功能13益為人們所認(rèn)識(shí)，其用途也越來(lái)越廣泛。比較經(jīng)濟(jì)實(shí)用的分離方法是溶劑法。溶劑法分離混合磷脂是根據(jù)混合磷脂中各組分在各種溶劑中的溶解性差異使之分離。早些時(shí)候主要是利用低級(jí)醇進(jìn)行分離。混合磷脂中PC在低級(jí)醇中溶解度較大，而PE和PI在低級(jí)醇中溶解性較小，利用溶解性的差異，可以得到富含PC或PE的產(chǎn)品。其中在低級(jí)醇中PC與PE的比例可以從原料中的1：1提高到3：1以上，甚至可以達(dá)到12：1(即醇中含PC為61％，沉淀中含PE為50％)。

溶劑法分離磷脂混合物從其所用的溶劑及其他物質(zhì)的不同，可以分為以下幾種方式。

1．單一溶劑法

用一種溶劑進(jìn)行抽提，可以得到富含某一組分的磷脂。最常用的溶劑是乙醇，因?yàn)樗鼘?duì)PC比對(duì)PI的溶解度大，而PE的溶解度介于其中。影響磷脂各組分在溶劑中的溶解度的因素有水的含量、溫度、溶劑的pH、調(diào)節(jié)pH所選的堿、酸。含水的乙醇可以改善PC的選擇性，并且加入單甘酯可以進(jìn)一步改善。M．Sosada等人研究了用乙醇做溶劑抽提菜油磷脂，磷脂中的PC含量從28％提高到58％。并作了條件實(shí)驗(yàn)。研究比較多的是從蛋黃磷脂中抽提得到富含PC的磷脂。重松康彥用異丙酮為溶劑，對(duì)氫化蛋黃磷脂中PC和PE進(jìn)行分離。其工藝是通過(guò)熱的溶劑對(duì)氫化卵磷脂溶解度的增加，而冷卻后PC和PE在這種溶劑中的溶解度不同而將PC和PE加以分離。其氫化蛋黃磷脂中PC的含量可以從7，7，．2％提高到97．6％。

美國(guó)專利5，214，171用低碳醇抽提磷脂混合物，通過(guò)調(diào)節(jié)溶劑的pH來(lái)調(diào)節(jié)磷脂各組分在溶劑中的溶解度，從而將各組分分離開(kāi)。在未調(diào)pH時(shí)，PC像報(bào)道的那樣是可溶的，而PE的溶解度比PC低很多，PA幾乎不溶；而降低pH，PC的溶解度只是輕微的增加，PE的溶解度下降很少，PA在pH小于5時(shí)溶解度增加很多，當(dāng)pH小于3或2時(shí)其溶解度增加更多；PC在pH升到10或更高時(shí)溶解度增加很多，PE在pH升到大于8時(shí)，其溶解度大幅度上升，當(dāng)pH上升到大于10(如10～11)PE溶解度上升4倍；而PI在醇中的溶解度不論是否調(diào)節(jié)pH都很低。調(diào)節(jié)pH所用的酸或堿應(yīng)該是食品級(jí)的酸或堿，鹽酸和氨水是最常用的酸和堿，它們價(jià)廉而且易于進(jìn)行無(wú)水添加。另外，特定的堿對(duì)于特定的pH來(lái)說(shuō)會(huì)影響某些磷脂的溶解度。比如用膽堿可以提高PC和PE的溶解度，特別是PE。

2．混合溶劑法

混合溶劑法是基于混合溶劑中的某一溶劑對(duì)磷脂的溶解度較大，而另外一種或幾種溶劑對(duì)其中某些組分溶解度比較小，從而將不同溶解度的各單磷脂加以分離。常用的溶解磷脂的溶劑為非極性溶劑類，而用于萃取的溶劑有甲醇、乙醇、乙腈等。釜田二用己烷和醋酸做混合溶劑對(duì)蛋黃進(jìn)行抽提。不同比例的溶劑萃取效果不同。PC含量可以從原料中的63．0％提高到73．0％，多次分離，PC的含量繼續(xù)提高。用己烷、乙醇和水按比例不同對(duì)蛋黃磷脂進(jìn)行抽提，可以得到富含PC或PE的產(chǎn)品。同時(shí)對(duì)不同濃度的乙醇對(duì)萃取效果的影響進(jìn)行了研究。PC的含量(在溶劑中的磷脂)可以達(dá)到77．5％，PE在沉淀中的含量可以達(dá)到77．6％。

美國(guó)專利4，814，111基于乙腈對(duì)PC、PE的選擇溶解性，即在室溫下，PC在乙腈中有一定的溶解性，而PE在乙腈中不溶解。用乙腈一烷烴(如己烷)或乙腈一氟碳化合物體系對(duì)磷脂混合物進(jìn)行抽提，PC被溶解在乙腈中，而PE則留在烷烴或氟碳化合物中，從而將兩者分開(kāi)。

3．無(wú)機(jī)鹽絡(luò)合法分離提純大豆磷脂

此方法是依據(jù)無(wú)機(jī)鹽和磷脂中的PE生成沉淀的性質(zhì)，把PE從溶劑中分離出來(lái)，再用適量的溶劑萃取出無(wú)機(jī)鹽，和其他的磷脂分離開(kāi)來(lái)。許多水溶性或醇溶性的金屬鹽，如鎂、鋅、鈣、鎘、鋁，都可以沉淀PE和PA，將PC留在醇溶液中。在食品和醫(yī)藥業(yè)中，只能用無(wú)毒的鹽，常用的鹽有硫酸鎂、氯化鎂、溴化鎂。醋酸鎂等，是硫酸鎂。鹽溶液可以用1～3個(gè)碳原子的脂肪族醇溶液，是甲醇和水。鹽的用量(用無(wú)水鹽來(lái)計(jì)算)，相對(duì)于磷脂原料的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1％～20％，是3％～8％，用量太多PC也會(huì)沉淀下來(lái)，用量太少PE等也會(huì)留在溶液中。早在1926年，瑞士專利No．127，256中就用CaCt：的醇溶液沉淀法制備磷脂，只是不能確定得到的磷脂是否帶有雜質(zhì)。

德國(guó)專利No．1070484，將丙酮脫油后的粗磷脂溶解于95％～100％的乙醇中，然后用MgSO。的甲醇／水溶液處理，于是PC被沉淀下來(lái)，實(shí)現(xiàn)了與PE的分離。l份的PC至少用0．5份(重量比)的MgSO；·7HzO來(lái)沉淀。當(dāng)使用MgSO。甲醇溶液時(shí)會(huì)有沉淀生成，而使用水溶液時(shí)，會(huì)得到團(tuán)狀物并且加入丙酮它會(huì)更加固化。徐展采用ZnCl。沉淀卵磷脂，用乙醇后處理ZnCl。，研究了ZnCI。和乙醇濃度對(duì)純度的影響。采用此無(wú)機(jī)鹽復(fù)合沉淀法可有效地除去非磷脂類雜質(zhì)以及腦磷脂等雜質(zhì)。

4．酶法

磷脂酶D作用于磷脂，可以使其酶解生成磷脂酸，用乙醇胺代替磷脂中的極性部分，從而得到腦磷脂。將適量含磷脂酶D的活性酶加入到溶解了乙醇胺的緩沖劑中(緩沖劑為乙酸或磷酸，pH為5～7，其中溶解了CaCl。作為反應(yīng)中介)，然后向反應(yīng)器中加入適量的磷脂(緩沖劑的用量為3～6倍的磷脂數(shù)量)，反應(yīng)在20一--50℃進(jìn)行，攪拌5～24小時(shí)。酶解反應(yīng)完成后，用水洗去反應(yīng)中的副產(chǎn)品，如膽堿、反應(yīng)中所用的酶和沒(méi)有反應(yīng)的乙醇胺等，得到高含量的PE。

美國(guó)專利200410235119AI制備腦磷脂的方法分兩步：步，將原料磷脂混合物加入到水中，水作為反應(yīng)媒介，其中含一種或兩種二價(jià)的金屬離子(如鈣離子、鎂離子、鋅離子)，用磷脂酶D將磷脂水解生成磷脂酸；第二步，向反應(yīng)體系中加入乙醇胺，生成所要的腦磷脂。  ．

5．乙?；?/p>

將PE通過(guò)?；磻?yīng)生成酰化磷脂，即APE。APE溶于丙酮，而PC不溶于丙酮，從而將兩者分開(kāi)。Marian Sosada等人將油菜籽磷脂中醇不溶部分(LElF，主要成分是PE、PI)在叔胺(嘧啶)存在的情況下，與乙酸酐反應(yīng)，生成乙?；字珹PE，然后用丙酮溶解APE，從而將其他磷脂組分分離除去。同時(shí)采用全因素正交設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，研究了反應(yīng)時(shí)間、嘧啶用量、溫度對(duì)腦磷脂轉(zhuǎn)化率(PECD)和乳化穩(wěn)定性指數(shù)(ESI)的影響，使PECD和ESl分別增長(zhǎng)了35％和60％。    ．

6．膜分離法

膜技術(shù)在精制植物油中的應(yīng)用相對(duì)來(lái)說(shuō)比較晚，分離磷脂開(kāi)始于1977年，在最近幾十年里發(fā)展迅速，并有大規(guī)模的應(yīng)用。用膜技術(shù)來(lái)提取磷脂受到了人們的重視，已經(jīng)有幾種膜可供選擇，其中一些是基于從油和己烷混合物中提取膠體；另一些是在沒(méi)有有機(jī)溶劑的情況下直接從植物油中提取。在種情況下，主要的困難是膜在有機(jī)溶劑中的穩(wěn)定性，后者則是油的粘度大，流量非常小。

Hancer M等學(xué)者研究了在非水介質(zhì)中磷脂和大豆油在親水和親油的表面形成膠柬和吸附的機(jī)理，這對(duì)超濾分離磷脂有指導(dǎo)意義。諸多研究都把膜的抗污染能力、流量和磷脂的截留量作為指標(biāo)，研究了膜的抗溶劑能力，其中聚酰亞胺被認(rèn)為具有優(yōu)秀的抗溶劑和耐高溫的能力。Kim等研究了自制聚酰亞胺超濾膜的性能，試驗(yàn)表明這種膜有良好的抗溶劑能力，能有效截留磷酯，聚合的磷脂相對(duì)分子質(zhì)量可達(dá)20 000。測(cè)量了膜的阻抗，表明凝膠體的阻抗大于膜本身的濃度差引起的阻抗，指出膜的污染應(yīng)該包括孔的多層吸附和表面的污染。sengupta用己烷作介質(zhì)，通過(guò)超濾膜從大豆油中除去磷脂，研究了幾種超濾膜分離甘油三酸脂和磷脂的選擇性。對(duì)用聚偏氟乙烯、聚砜醚和聚砜制取的四種膜進(jìn)行了檢測(cè)，認(rèn)為除了膜的材料，孔徑也是膜穩(wěn)定的一個(gè)因素；滲透量在開(kāi)始階段急速下降是由于濃差極化和膜內(nèi)部的污染引起的。試驗(yàn)結(jié)果表明聚偏氟乙烯在己烷中更穩(wěn)定，開(kāi)始階段的流量下降比其他二者慢。Andras Koris的研究表明膜能有效制取磷脂，其中一種膜(稱為Mavibran SPISA)當(dāng)壓力為0．15 MPa，溫度為60℃，進(jìn)料速度為0．13 rll3／h時(shí)，磷脂的收率能夠達(dá)到70％～77％，通過(guò)添加少許水，截留量能夠達(dá)到97％。

7．超臨界二氧化碳萃取法

超臨界流體萃取(簡(jiǎn)稱SFE)技術(shù)是20世紀(jì)70年代興起的一門新的分離技術(shù)，尤其是超臨界CO：的應(yīng)用，開(kāi)辟了一個(gè)全新的研究領(lǐng)域，成為多學(xué)科交叉的熱點(diǎn)，由于超臨界二氧化碳萃取操作參數(shù)易于控制，極為適合處理熱敏性的物質(zhì)，可制得高品質(zhì)的粉末磷脂。呂維忠等在國(guó)內(nèi)率先研究了超臨界Co。萃取法。他們采取正交試驗(yàn)，考慮萃取壓力、溫度和時(shí)間對(duì)萃取的影響。薄層分析結(jié)果表明，與化學(xué)溶劑萃取技術(shù)分離的磷脂結(jié)果基本上吻合。用超臨界流體分離大豆卵磷脂，一般需加入夾帶劑，這涉及到在超臨界CO：和夾帶劑混合體系中，磷脂和混合體系的熱力學(xué)和動(dòng)力學(xué)的問(wèn)題。國(guó)外在這方面做了大量工作，認(rèn)為超臨界CO。溶解不同物質(zhì)的能力可用色譜上的溶解度參數(shù)艿，理論來(lái)評(píng)估，溶解度參數(shù)從流體的狀態(tài)效應(yīng)和化學(xué)效應(yīng)兩方面進(jìn)行描述。大豆磷脂中主要含有PI、PC和PE，經(jīng)過(guò)對(duì)它們?nèi)芙鈪?shù)的計(jì)算，理論上能進(jìn)行分離，事實(shí)上也證明是可以分離的。汪勇等人進(jìn)行了超臨界萃取的工藝條件和動(dòng)力學(xué)研究，將非穩(wěn)態(tài)萃取分為恒速和降速階段，采用一般的傳質(zhì)模型進(jìn)行了動(dòng)力學(xué)關(guān)聯(lián)，引進(jìn)了操作因子Ka，分析了固相物料中的油濃度和溶劑相中的油濃度的關(guān)系，模擬結(jié)果跟試驗(yàn)操作基本符合，指出溫度和壓力是主要因素，對(duì)工業(yè)化生產(chǎn)有重要意義。

磷脂酰乙醇胺(腦磷脂)的合成^【4】

1．利用CDP一二脂酰甘油合成途徑  在一些低等的真核生物及某些微生物體內(nèi)，所有的甘油磷脂都是利用CDP一二脂酰甘油合成的。

2．利用CDP一乙醇胺合成途徑在高等動(dòng)、植物體內(nèi)，乙醇胺在乙醇胺激酶催化下，利用ATP磷酸化生成磷酸乙醇胺，磷酸乙醇胺在CDP一磷酸乙醇胺胞苷轉(zhuǎn)移酶催化下，與CTP反應(yīng)生成CDP一乙醇胺；磷脂酸在磷酸酶催化下水解為二脂酰甘油；然后二脂酰甘油與CDP一乙醇胺在脂酰甘油轉(zhuǎn)移酶催化下形成腦磷脂。

參考文獻(xiàn)

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