背景^[1]

在哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)，PARP酶家族至少包括17個(gè)成員，然而，只有PARP1、PARP2和PARP3參與DNA損傷修復(fù)活動(dòng)。其中，PARP1酶參與細(xì)胞內(nèi)85％以上的PARP酶活動(dòng)，PARP3與PARP1形成異構(gòu)二聚體參與DDR反應(yīng)。PARP1和（或）PARP2參與DNA單鏈損傷修復(fù)，PARP1也參與DNA雙鏈損傷修復(fù)。

PARP1和PARP2功能有部分重疊，但對(duì)底物選擇性有差異。PARP3在DNA雙鏈損傷修復(fù)中起招募修復(fù)蛋白和DSB末端連接復(fù)合物的支架作用。PARP是DDR通路的重要DNA斷裂分子感受器，在DNA損傷后被激活，PARP可以感受DNA單鏈損傷缺口，并結(jié)合到DNA斷裂部位，結(jié)合PARP酶后的催化活性增強(qiáng)500倍以上。

PARP通過自身的糖基化來催化煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）分解為煙酰胺和ADP核糖，再以ADP核糖為底物，使受體蛋白以及PARP1自身發(fā)生“PAR化”，形成PARP-ADP核糖支鏈。這樣一方面可以阻止損傷部位周圍的DNA分子與損傷的DNA進(jìn)行重組，同時(shí)吸引DNA修復(fù)蛋白、組蛋白Ｈ1和一系列轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合在DNA損傷處；另一方面，可以降低PARP1與DNA的親和性，使PARP1從DNA斷裂處解離，然后DNA修復(fù)蛋白與DNA缺口結(jié)合，對(duì)損傷部位進(jìn)行修復(fù)。而PARP1的“PAR化”會(huì)被其他酶清除，使得PARP1恢復(fù)活性。

PARP(剪切的)單克隆抗體為在人PARP的214/215切割位點(diǎn)附近含有氨基酸的合成肽，產(chǎn)品為100 ug 無色溶液，其濃度為0.5 mg/ml，溶解于包含有50%甘油，1% BSA和0.02% 疊氮鈉的PBS緩沖液中。

PARP(剪切的)單克隆抗體可用于WB，IP，IF，ICC，F(xiàn)C，不同應(yīng)用濃度不同。PARP(剪切的)單克隆抗體于-20℃保存，Western一抗稀釋液-20℃或4℃保存，一年有效。Western一抗稀釋液優(yōu)先推薦4℃保存，長期不使用可以考慮-20℃保存，但凍融可能會(huì)導(dǎo)致出現(xiàn)輕微的渾濁和少量不溶物。 如果PARP(剪切的)單克隆抗體用于Western blot (WB)、免疫熒光(IF)、免疫細(xì)胞化學(xué)(ICC)等實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)注意回收使用過的稀釋抗體。

回收的抗體通常至少可以重復(fù)使用5-10次。稀釋后的抗體，包括已經(jīng)使用過的稀釋抗體，請(qǐng)4℃保存。 回收后重復(fù)使用的抗體，使用方法同新鮮稀釋的抗體。如果在重復(fù)使用過程中發(fā)現(xiàn)抗體出現(xiàn)輕微混濁現(xiàn)象，可以10000g離心1-3分鐘，取上清用于后續(xù)檢測(cè)。如果回收的抗體出現(xiàn)明顯的絮狀物或長霉長菌等情況，則可以考慮廢棄該抗體。

主要參考資料

[1] 鄭宇靜, 左彤彤, 封宇飛. 靶向 DNA 損傷反應(yīng)途徑: PARP 抑制劑抗腫瘤治療研究進(jìn)展[J]. 2018.