背景^[1][2]

混合系列蛋白激酶樣結(jié)構(gòu)域( mixed lineage kinase domain-likeprotein，MLKL)是一種激酶樣蛋白，在多種人體多個器官中中廣泛存在，在不少腫瘤組織中呈低表達狀態(tài)，如卵巢癌，并參與多種腫瘤的程序性壞死，影響腫瘤細胞的自噬和凋亡，抑制化療耐藥。MLKL 蛋白與腫瘤發(fā)生發(fā)展的關(guān)系受到越來越多學者的重視。然而MLKL 與乳腺癌臨床病理特點及預(yù)后的關(guān)系，國內(nèi)外的研究并不多見。

研究表明MLKL 低表達是乳腺癌患者預(yù)后不佳的生物學標記物。MLKL 低表達提示乳腺癌患者組織分化不佳、腫瘤浸潤、淋巴轉(zhuǎn)移及進展期TNM 分期，提示MLKL 可能可以作為乳腺癌的生物學標記物及潛在治療指標。單克隆抗體技術(shù)起源于Kohler等創(chuàng)建的體外鼠源雜交瘤技術(shù)。經(jīng)多年研究，鼠單抗已從單純的生物實驗室科研及臨床診斷發(fā)展到治療性抗體藥物。

但鼠單抗的主要缺陷是小鼠免疫系統(tǒng)不能識別某些免疫原，尤其是鼠源性的免疫原，而且鼠單抗的親和性不如兔來源抗體的親和性高。然而由于沒有發(fā)現(xiàn)兔源性的漿細胞瘤及病毒體外轉(zhuǎn)染兔B細胞的技術(shù)困難，直到1995年在c-myc/v-abl轉(zhuǎn)基因兔身上成功地獲得了兔漿細胞瘤細胞系，得到了穩(wěn)定的兔-兔雜交瘤，才使兔單克隆抗體技術(shù)有了突破性進展。

近年兔單克隆抗體技術(shù)日臻完善，目前商品化的兔單抗已達數(shù)千種。 MLKL兔單克隆抗體 -20℃保存，Western一抗稀釋液-20℃或4℃保存，一年有效。Western一抗稀釋液優(yōu)先推薦4℃保存，長期不使用可以考慮-20℃保存，但凍融可能會導致出現(xiàn)輕微的渾濁和少量不溶物。如果 MLKL兔單克隆抗體用于Western blot (WB)、免疫熒光(IF)、免疫細胞化學(ICC)等實驗，請注意回收使用過的稀釋抗體?；厥盏目贵w通常至少可以重復使用5-10次。稀釋后的抗體，包括已經(jīng)使用過的稀釋抗體，請4℃保存。

 MLKL兔單克隆抗體僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。如有實驗研究桔梗皂苷D 通過FOXO3a 通路介導前列腺癌PC-3 細胞程序性壞死，其中使用的兔抗人MLKL單克隆抗體（MLKL兔單克隆抗體）和兔抗人磷酸化MLKL（p-MLKL）單克隆抗體均購自英國Abcom公司。

應(yīng)用^[1]

1. 在生物標記物開發(fā)中的應(yīng)用

兔單克隆抗體包括MLKL兔單克隆抗體廣泛用于生命科學研究的各個領(lǐng)域，尤其在免疫組織化學以及檢測蛋白的轉(zhuǎn)譯后修飾方面具有獨特優(yōu)勢。至今已有100多種兔單克隆抗體開發(fā)用于癌癥的IHC臨床診斷與研究，其中最具代表性的就是Her2和c-Kit的IHC診斷試劑盒。在蛋白修飾研究領(lǐng)域，如蛋白的磷酸化，在與疾病相關(guān)的蛋白質(zhì)信號通路中起到了至關(guān)重要的作用，使用磷酸化蛋白的兔單克隆抗體可以非常清楚地顯示蛋白的磷酸化程度。目前已有200多種磷酸化特異性的兔單克隆抗體面世。

2. 在治療抗體藥物開發(fā)中的應(yīng)用

臨床使用的大多數(shù)治療用抗體均需經(jīng)體外親和力成熟這一步驟，以提高抗體的親和力。這一過程常需8至12個月，最終親和力在納摩爾級(10-9 mol/L)。兔單抗不需使用體外親和力成熟，就能達到10-11至10-13 mol/L。這種高親和力不僅減少抗體的臨床使用量，還能減少由于使用大量抗體帶來的副作用。但這種高親和力的優(yōu)勢還需在動物和臨床試驗中進一步證實。

另外，與鼠單抗的人源化相比，兔單克隆抗體的人源化更容易。因為，兔單克隆抗體主要由一種重鏈及輕鏈基因構(gòu)成，通過分析大量的兔單克隆抗體序列發(fā)現(xiàn)，兔與人的抗體同源性更高，約60%～76%，而小鼠與人的抗體同源性略低，為57%～72%，說明用兔單克隆抗體開發(fā)藥物前景更廣闊。

主要參考資料

[1] 李婷婷, 崔慧斐. 兔單克隆抗體的發(fā)展及應(yīng)用前景[J]. 食品與藥品, 2012, 14(9): 373-376.

[2] MLKL 蛋白在乳腺癌根治術(shù)后患者中的應(yīng)用