背景[1-3]
大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基由精心優(yōu)化，經(jīng)過長期測試，本產(chǎn)品可保持大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞的生長狀態(tài)。大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基已包含大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞生長所需的各種成分，無需添加任何成分，可直接用于大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)。
大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基成分包含基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清、雙抗、細(xì)胞生長需要的其他添加物，經(jīng)過近千種各類細(xì)胞嚴(yán)格的培養(yǎng)驗(yàn)證。完全培養(yǎng)基包含常規(guī)完全培養(yǎng)基、原代細(xì)胞完全培養(yǎng)基、細(xì)胞系專用培養(yǎng)基，包含細(xì)胞生長需要的各種氨基酸、維生素、碳水化合物、無機(jī)鹽離子等營養(yǎng)物質(zhì)，可保持細(xì)胞的生長狀態(tài)。
大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基
心肌主動(dòng)脈是供給心臟血液的動(dòng)脈。主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞分離自正常大鼠心肌主動(dòng)脈，呈單層扁平分布。內(nèi)皮細(xì)胞或血管內(nèi)皮是一薄層的專門上皮細(xì)胞，由一層扁平細(xì)胞所組成。它形成血管的內(nèi)壁，是血管管腔內(nèi)血液及其他血管壁（單層鱗狀上皮）的接口。內(nèi)皮細(xì)胞是沿著整個(gè)循環(huán)系統(tǒng)，由心臟直至最少的微血管。
培養(yǎng)操作
1.取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時(shí)或者過夜，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2.待細(xì)胞達(dá)到80%匯合時(shí)準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
3.細(xì)胞傳代
1)吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2)添加0.125%胰蛋白酶消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入完全培養(yǎng)液終止消化；
3)用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代，然后補(bǔ)充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL，放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4)待細(xì)胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的完全培養(yǎng)基。
應(yīng)用[4][5]
用于血管緊張素（1-7）對(duì)ox-LDL誘導(dǎo)的大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞LOX-1、ICAM-1、VCAM-1表達(dá)的影響研究
在體外培養(yǎng)大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞（SVAREC）,通過不同濃度ox-LDL誘導(dǎo)和在ox-LDL基礎(chǔ)上加入Ang-（1-7）誘導(dǎo),觀察內(nèi)皮細(xì)胞前后增殖情況及LOX-1、VCAM-1、ICAM-1轉(zhuǎn)錄水平的動(dòng)態(tài)改變及Ang-（1-7）保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞的可能機(jī)制。為更深入理解AS形成的分子機(jī)制以及尋找抗AS藥物潛在的分子靶點(diǎn)。
方法:1.實(shí)驗(yàn)用Cell Counting Kit（CCK-8）檢測經(jīng)ox-LDL組和ox-LDL+Ang-（1-7）組處理后SVAREC細(xì)胞的增殖情況。
2. 實(shí)驗(yàn)用熒光實(shí)時(shí)定量聚合酶反應(yīng)（RT-PCR）法檢測經(jīng)過ox-LDL組和ox-LDL+Ang-（1-7）組處理后的SVAREC細(xì)胞LOX-1、VCAM-1、ICAM-1m RNA的表達(dá)水平。
結(jié)果:1.用Cell Counting Kit（CCK-8）檢測結(jié)果顯示:①ox-LDL組:加入不同濃度的ox-LDL（加入濃度為10mg/L、20mg/L、50mg/L、100mg/L）和SVAREC細(xì)胞分組培養(yǎng)24h,發(fā)現(xiàn)其明顯抑制SVAREC細(xì)胞的生長增殖。在0-100mg/L的濃度范圍內(nèi),隨ox-LDL藥物濃度增加,ox-LDL實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞增殖抑制率逐漸升高,并呈現(xiàn)劑量依賴性關(guān)系,與同時(shí)間對(duì)照組相比較,它們之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。②ox-LDL+Ang-（1-7）組:實(shí)驗(yàn)組在加入終濃度為100mg/L的ox-LDL試劑的基礎(chǔ)上,再分別加入Ang-（1-7）濃度為10-9mol/L、10-8mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L和SVAREC細(xì)胞分組培養(yǎng)24h后,隨著Ang-（1-7）濃度的升高,該組SVAREC細(xì)胞的生長抑制率逐漸降低,并呈現(xiàn)劑量依賴性,與同時(shí)間對(duì)照組相比較,它們之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
3. 實(shí)驗(yàn)用RT-PCR法檢測結(jié)果顯示:①ox-LDL組:加入不同濃度的ox-LDL（加入濃度為10mg/L、20mg/L、50mg/L、100mg/L）和SVAREC細(xì)胞分組培養(yǎng)24h后。在0-100mg/L的濃度范圍內(nèi),隨著ox-LDL的濃度升高,LOX-1、VCAM-1、ICAM-1m RNA的表達(dá)水平升高,與同時(shí)間對(duì)照組相比較,它們之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
②ox-LDL+Ang-（1-7）組:實(shí)驗(yàn)組在加入終濃度為100mg/L的ox-LDL試劑的基礎(chǔ)上,再分別加入Ang-（1-7）濃度為10-9mol/L、10-8mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L和SVAREC細(xì)胞分組培養(yǎng)24h后,隨著Ang-（1-7）濃度的升高,隨著Ang-（1-7）的濃度升高,LOX-1、VCAM-1、ICAM-1m RNA的表達(dá)水平明顯降低,與同時(shí)間對(duì)照組相比較,它們之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
參考文獻(xiàn)
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