背景[1-3]
脫氧核糖核酸酶2抗體是一類可以特異性結(jié)合脫氧核糖核酸酶2的多克隆抗體，主要用于檢測(cè)脫氧核糖核酸酶2的免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)。脫氧核糖核酸（DNA）是生物細(xì)胞內(nèi)攜帶有合成RNA和蛋白質(zhì)所必需的遺傳信息的一種核酸，是生物體發(fā)育和正常運(yùn)作必不可少的生物大分子。
脫氧核糖核酸酶即是DNA酶，灰色至類白色粉末。用于從蛋白樣品中去除DNA，但無(wú)法水解緊密的核染色質(zhì)。
脫氧核糖核酸（英文DeoxyriboNucleic Acid，縮寫為DNA）是生物細(xì)胞內(nèi)含有的四種生物大分子之一核酸的一種。
DNA攜帶有合成RNA和蛋白質(zhì)所必需的遺傳信息，是生物體發(fā)育和正常運(yùn)作必不可少的生物大分子。
DNA由脫氧核苷酸組成的大分子聚合物。脫氧核苷酸由堿基、脫氧核糖和磷酸構(gòu)成。其中堿基有4種：腺嘌呤（A）、鳥嘌呤（G）、胸腺嘧啶（T）和胞嘧啶（C）。
DNA分子結(jié)構(gòu)中，兩條多脫氧核苷酸鏈圍繞一個(gè)共同的中心軸盤繞，構(gòu)成雙螺旋結(jié)構(gòu)。
脫氧核糖-磷酸鏈在螺旋結(jié)構(gòu)的外面，堿基朝向里面。兩條多脫氧核苷酸鏈反向互補(bǔ)，通過(guò)堿基間的氫鍵形成的堿基配對(duì)相連，形成相當(dāng)穩(wěn)定的組合。
應(yīng)用[4][5]
用于旋毛蟲新生幼蟲脫氧核糖核酸酶Ⅱ表達(dá)及鑒定研究
通過(guò)篩選旋毛蟲新生幼蟲差減cDNA文庫(kù)所獲得的新生幼蟲期特異性表達(dá)基因N5（基因庫(kù)注冊(cè)號(hào)為:AF331159）進(jìn)行Interproscan檢索,發(fā)現(xiàn)N5可能編碼脫氧核糖核酸酶Ⅱ（DNaseⅡ）。
構(gòu)建原核表達(dá)載體pET28a-N5。將重組質(zhì)粒pET28a-N5放入表達(dá)菌E.coli BL21（DE3）。用IPTG在不同的表達(dá)條件（不同溫度、IPTG濃度、細(xì)菌的OD值）對(duì)重組表達(dá)菌BL21（DE3）進(jìn)行誘導(dǎo),對(duì)菌體裂解物進(jìn)行SDS-PAGE分析。結(jié)果顯示:不同誘導(dǎo)條件下表達(dá)表達(dá)量不同。
利用尿素提取包涵體法提取不同條件下表達(dá)的包涵體。將包涵體分別溶于TE（Triscl-EDTA）、PBS（磷酸鹽緩沖液）置于4℃冰箱中復(fù)性,然后用包涵體復(fù)性后的上清液對(duì)λDNA進(jìn)行酶切分析,結(jié)果表明:復(fù)性后的包涵體上清液中的可溶蛋白具有較強(qiáng)的核酸酶活性。
通過(guò)對(duì)N5基因序列分析以及將N5同其他物種的脫氧核糖核酸酶Ⅱ基因進(jìn)行比對(duì),發(fā)現(xiàn)N5基因在基因水平上屬于編碼脫氧核糖核酸酶Ⅱ基因家族成員,并找出N5基因編碼活性中心氨基酸和中心內(nèi)關(guān)鍵氨基酸的堿基序列,通過(guò)PCR進(jìn)行對(duì)編碼關(guān)鍵氨基酸-組氨酸的密碼子分別定點(diǎn)突變?yōu)榫幋a賴氨酸和絲氨酸的密碼子（突變后的基因分別命名為MC578A-29、MC578B-29）。
突變后,同樣構(gòu)建原核表達(dá)載體pET28a-MC578A-29、pET28a-MC578B-29,進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)和酶活性測(cè)定,發(fā)現(xiàn)突變后所編碼的蛋白通過(guò)溶于PBS,4℃進(jìn)行復(fù)性,復(fù)性后上清液中的可溶蛋白核酸酶活性明顯下降或喪失。
說(shuō)明:活性中心的分析和定點(diǎn)突變位置的選擇是正確的。對(duì)N5和MC578A-29、MC578B-29表達(dá)產(chǎn)物在不同條件進(jìn)行酶活分析,證明該N5基因編碼的脫氧核糖核酸酶具有DNaseII的特性。
參考文獻(xiàn)
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[5]龍民慧.旋毛蟲新生幼蟲脫氧核糖核酸酶Ⅱ表達(dá)及鑒定[D].吉林大學(xué),2005.