牛血清白蛋白大概（BSA）是生化實(shí)驗(yàn)室最為常見、應(yīng)用最為廣泛的蛋白質(zhì)了。雖然小小的BSA并不那么起眼，但是在生化實(shí)驗(yàn)當(dāng)中，卻常常扮演十分關(guān)鍵的角色。

BSA前體蛋白全長607個(gè)氨基酸。前體蛋白從N端脫去18個(gè)信號肽，以及6個(gè)前肽，形成含有583個(gè)氨基酸、分子量約為66.5kDa的成熟BSA蛋白。

應(yīng)用

BSA的應(yīng)用非常廣泛。在生化實(shí)驗(yàn)中，常將BSA用于維持蛋白穩(wěn)定性，以及ELISA實(shí)驗(yàn)、western blot，以及磁免疫檢測中的固相封閉。

1 維持蛋白的穩(wěn)定性

當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)處于“壓力”的狀態(tài)下，如加熱、紫外照射、氧化、剪切力等，蛋白質(zhì)的空間折疊趨于延展，導(dǎo)致內(nèi)部疏水位點(diǎn)暴露，發(fā)生無定形聚集或者形成高結(jié)構(gòu)化的淀粉樣蛋白，從而失去生物活性。BSA具有良好的熱穩(wěn)定性，當(dāng)溫度上升至65度時(shí)，其空間結(jié)構(gòu)的變化依然是可逆的。BSA另一個(gè)特點(diǎn)是能夠和許多物質(zhì)形成可逆結(jié)合，特別是水溶性較差的物質(zhì)，如脂肪酸、血紅素、膽紅素、帶負(fù)電荷的芳香化合物等，能夠增加其水溶性。因此，BSA是理想的蛋白保護(hù)劑。當(dāng)酶、或抗體等蛋白質(zhì)發(fā)生空間結(jié)構(gòu)變化，BSA能夠與其發(fā)生可逆結(jié)合，形成穩(wěn)定的、可溶的高分子復(fù)合物，防止蛋白發(fā)生無定形聚集。另外，溶液中的BSA能夠與容器表面結(jié)合，防止蛋白吸附在容器表面而濃度降低。

2 免疫檢測當(dāng)中固相封閉蛋白

在免疫檢測過程中，需要將抗體固定在固相表面，如微孔板，磁顆粒、聚苯乙烯微球或硝酸纖維膜表面。由于蛋白是一種粘性較大的分子，檢測過程中，樣本中的雜蛋白會與固相表面的疏水位點(diǎn)發(fā)生非特異性結(jié)合，造成背景干擾。因此，需要將固相表面的多余位點(diǎn)用封閉劑將其封閉，常用的封閉劑，如BSA、酪蛋白、明膠等能夠吸附在固相表面，防止抗體、或者抗原與固相表面發(fā)生非特異性結(jié)合，降低檢測本底，提高靈敏度。

BSA是一種球蛋白，分子量約為66.5kDa，表面含有大量的氨基和羧基殘基，并且BSA的空間結(jié)構(gòu)能夠隨著溫度、pH、鹽濃度發(fā)生變化，是一種柔性分子。作為常見的封閉蛋白，BSA能夠與親水表面、疏水表面，以及活化的共價(jià)結(jié)合表面，如活化羧基、氨基、環(huán)氧基、甲苯磺?；冉Y(jié)合，抑制非特異性吸附，是一種理想的固相封閉劑。

BSA表面含有大量的羧基、氨基，能夠用于表面的活化基團(tuán)結(jié)合，封閉多余位點(diǎn)，最為常見的是化學(xué)發(fā)光免疫磁珠偶聯(lián)抗體當(dāng)中的應(yīng)用。如用EDC活化羧基表面磁珠后，能夠和抗體表面氨基反應(yīng)，使抗體共價(jià)結(jié)合在磁珠表面。這一過程需要對多余的活化羧基位點(diǎn)進(jìn)行封閉，BSA分子尺寸更小，能夠進(jìn)入到表面抗體間的間隙，并且由于表面含有大量的氨基，與活化羧基反應(yīng)，封閉多余的活性位點(diǎn)。同時(shí)，BSA表面含有大量的羧基，還能夠改善磁珠的親水性。另外，BSA表面含有一定的氨基酸疏水殘基，如丙氨酸、亮氨酸等，也能夠?qū)Ρ砻娴氖杷稽c(diǎn)進(jìn)行封閉。

值得注意的是，Larsericsdotter等人研究發(fā)現(xiàn)，BSA在磷酸鹽溶液中，在固相表面吸附更為緊湊，形成的結(jié)構(gòu)也更為穩(wěn)定。這是因?yàn)?，磷酸鹽與BSA上的甘氨酸和精氨酸結(jié)合，能夠消除結(jié)構(gòu)性靜電排斥。因此BSA在磷酸緩沖液中結(jié)構(gòu)更為穩(wěn)定，在固相表面具有更高的結(jié)合效率。

BSA除了能夠用作蛋白穩(wěn)定劑、固相封閉劑之外，還可以作為小分子的載體，如通過把熒光分子修飾在BSA表面，再將熒光-BSA與抗體偶聯(lián)，在增加熒光強(qiáng)度的同時(shí)，避免由于抗體的過度修飾而導(dǎo)致抗體失活。

來源：生物醫(yī)學(xué)知識局