背景及概述^[1]

星形膠質(zhì)細(xì)胞是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中含量最豐富的細(xì)胞。星形膠質(zhì)細(xì)胞具有多種生物學(xué)功能，如支持參與血腦屏障形成的內(nèi)皮細(xì)胞，為神經(jīng)元提供營(yíng)養(yǎng)，維持細(xì)胞外離子平衡，促進(jìn)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的修復(fù)。星形膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基-無(wú)血清 ACM-SF已廣泛應(yīng)用于培養(yǎng)神經(jīng)元和內(nèi)皮細(xì)胞。

培養(yǎng)方法研究^[2]

徐立新等人探索應(yīng)用無(wú)血清培養(yǎng)基進(jìn)行大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞原代培養(yǎng)及傳代培養(yǎng)的方法。方法：取出生24 h內(nèi)Wistar大鼠大腦皮質(zhì)組織,機(jī)械吹打分散為單細(xì)胞后在無(wú)血清培養(yǎng)基中進(jìn)行原代培養(yǎng)。細(xì)胞傳代時(shí)分別使用乙二胺四乙酸(EDTA)-胰酶或胰酶作為消化液,濃度為0.2 mg/ml或1 mg/ml的大豆胰蛋白酶抑制劑(SBTL)終止消化作用,按照1:2或1:3的比例傳代。顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)細(xì)胞免疫熒光染色方法鑒定細(xì)胞表型,MTT法檢測(cè)傳代細(xì)胞增殖情況。結(jié)果：細(xì)胞懸液靜置15 min后更換新的無(wú)血清培養(yǎng)基培養(yǎng),7 d后顯微鏡下可見(jiàn)細(xì)胞生長(zhǎng)良好,折光性強(qiáng),胞體小而突起長(zhǎng);細(xì)胞免疫熒光染色鑒定顯示>95%的細(xì)胞為GFAP陽(yáng)性細(xì)胞。與應(yīng)用SBTI終止胰酶反應(yīng)時(shí)未進(jìn)行離心比較,低溫、低速離心(4℃、3 000×g)3 min后,傳代細(xì)胞可在無(wú)血清培養(yǎng)基中生長(zhǎng)正常并增殖。MTT檢測(cè)結(jié)果顯示,EDTA-胰酶消化效果優(yōu)于胰酶(A值分別為0.290±0.007、0.270±0.006,P<0.010);使用濃度為0.2 mg/ml或1 mg/ml的SBTI終止消化(A值分別為0.290±0.013、0.290±0.017,P=0.820)及以1:2或1:3比例傳代(A值分別為0.340±0.070、0.320±0.030,P=0.770),傳代星形膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論：本研究建立無(wú)血清培養(yǎng)基進(jìn)行大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞原代及傳代培養(yǎng)的方法,為避免血清干擾更好地開(kāi)展體外星形膠質(zhì)細(xì)胞功能的研究提供了新的細(xì)胞模型。

參考文獻(xiàn)

[1] 星形膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基--無(wú)血清產(chǎn)品介紹

[2]徐立新,賈梅,師忠芳,董麗萍,閆旭,王玉嬌,陳燁,袁芳.大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)方法的研究[J].中華神經(jīng)外科雜志,2018,34(06):633-636.