背景[1-3]
普通級(jí)馬血清采自健康馬，促細(xì)胞生長(zhǎng)效用一般，無(wú)菌、無(wú)支原體，血紅蛋白含量小于20mg/ml，總蛋白含量大于5.00g/dl。主要適用于微生物培養(yǎng)及診斷試劑生產(chǎn)。
血清是由血漿去除纖維蛋白原而形成的一種很復(fù)雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，且血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏男詣e、年齡、生理?xiàng)l件和營(yíng)養(yǎng)條件不同而異。血清是血漿中不含纖維蛋白原的膠狀液體,具有維持血液的正常粘度、酸堿度、滲透壓等作用。
它主要由水和各種化學(xué)成分組成，這些化學(xué)成分包括白蛋白，α1、α2、β、γ-球蛋白，甘油三酯，總膽固醇，谷丙轉(zhuǎn)氨酶等。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長(zhǎng)因子、激素、無(wú)機(jī)物等，這些物質(zhì)對(duì)促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)或抑制生長(zhǎng)活性是達(dá)到生理平衡的。對(duì)血清的成分和作用的研究雖有很大進(jìn)展，但仍存在一些問(wèn)題。
普通級(jí)馬血清在細(xì)胞培養(yǎng)中主要作用
1提供基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：氨基酸、維生素、無(wú)機(jī)物、脂類物質(zhì)、核酸衍生物等，是細(xì)胞生長(zhǎng)必須的物質(zhì)。
2提供激素和各種生長(zhǎng)因子：胰島素、腎上腺皮質(zhì)激素（氫化可的松、地塞米松）、類固醇激素（雌二醇、睪酮、孕酮）等。生長(zhǎng)因子如成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、表皮生長(zhǎng)因子、血小板生長(zhǎng)因子等。
3提供結(jié)合蛋白：結(jié)合蛋白作用是攜帶重要的低分子量物質(zhì)，如白蛋白攜帶維生素、脂肪、以及激素等，轉(zhuǎn)鐵蛋白攜帶鐵。結(jié)合蛋白在細(xì)胞代謝過(guò)程中起重要作用。
4提供促接觸和伸展因子使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷。
5對(duì)培養(yǎng)中的細(xì)胞起到某些保護(hù)作用：有一些細(xì)胞，如內(nèi)皮細(xì)胞、骨髓樣細(xì)胞可以釋放蛋白酶，血清中含有抗蛋白酶成分，起到中和作用。
應(yīng)用[4][5]
用于補(bǔ)陽(yáng)還五湯對(duì)PAF誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞損傷的神經(jīng)保護(hù)作用研究
究結(jié)合缺血性神經(jīng)損傷中已探明的病理生理機(jī)制,建立缺氧損傷神經(jīng)細(xì)胞模型,觀察其對(duì)缺氧PC12細(xì)胞損傷模型細(xì)胞形態(tài)學(xué)、存活力及上清液中PAF含量的影響,探討補(bǔ)陽(yáng)還五湯含藥血清對(duì)缺氧損傷PC12細(xì)胞的保護(hù)作用,為進(jìn)一步研究該方神經(jīng)細(xì)胞損傷保護(hù)作用,反映該方對(duì)神經(jīng)細(xì)胞損傷過(guò)程的多環(huán)節(jié)干預(yù),篩選出對(duì)神經(jīng)細(xì)胞損傷有保護(hù)作用的有效成分提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。目的：探討補(bǔ)陽(yáng)還五湯含藥血清對(duì)缺氧損傷PC12細(xì)胞的保護(hù)作用。
方法：1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、分組及模型建立：普通級(jí)新西蘭兔6只,隨機(jī)分為：正常組2只（蒸餾水組）、含藥血清組2只（補(bǔ)陽(yáng)還五湯組）、陽(yáng)性對(duì)照組2只（金納多組）：每組動(dòng)物分別給予相同體積10ml/kg灌服,1次/d,連續(xù)7d。
2、標(biāo)本的采集及研究方法：末次給藥前禁食12 h,給藥2h后采血（耳中央動(dòng)脈）制備含藥血清。將已80%融合的PC12細(xì)胞分為6組,補(bǔ)陽(yáng)還五湯（BYHWD）含藥血清高劑量組（10%）,補(bǔ)陽(yáng)還五湯（BYHWD）含藥血清低劑量組（2.5%）,陽(yáng)性對(duì)照組（金納多含藥血清5%）,空白血清組（正常兔血清5%）,模型組（無(wú)兔血清）,正常組（正常培養(yǎng)含牛、馬血清各5%）,按相應(yīng)分組更換含藥血清培養(yǎng)基。
將已分組加藥的PC12細(xì)胞置于37℃、5%CO2和90%氮?dú)獾娜龤馀囵B(yǎng)箱內(nèi),制作缺氧模型。①PC12細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察,缺氧1.5h,3h,18h后,用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)的變化,并用圖像采集系統(tǒng)進(jìn)行拍攝；
②缺氧造模18h后,MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活力；
③缺氧造模1.5 h后,Annexin V/PI檢測(cè)細(xì)胞凋亡率；
④缺氧造模1.5h后,酶聯(lián)免疫法（Elisa法）檢測(cè)培養(yǎng)上清PAF含量。
參考文獻(xiàn)
[1]Cyclooxygenase-2 mediates platelet-activating factor-induced prostaglandin E 2 release from rat primary astrocytes[J].Lisa A.Teather,Richard J.Wurtman.Neuroscience Letters.2003(3)
[2]Hypoxia/reoxygenation induces cell injury via different mechanisms in cultured rat cortical neurons and glial cells[J].Ju-Yu Wang,Andrew Y.-C Shum,Jia-Yi Wang.Neuroscience Letters.2002(3)
[3]Platelet‐activating factor induces cell death in cultured astrocytes and oligodendrocytes:Involvement of caspase‐3[J].Mary EllenHostettler,Pamela E.Knapp,Sonia L.Carlson.Glia.2002(3)
[4]Neuroprotection in cerebrovascular disease[J].Jain.Expert Opinion on Investigational Drugs.2000(4)
[5]郭詠霞.補(bǔ)陽(yáng)還五湯對(duì)PAF誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞損傷的神經(jīng)保護(hù)作用[D].南方醫(yī)科大學(xué),2011.