背景[1-3]
標(biāo)準(zhǔn)兔血清(碳吸附過濾)是用無菌家兔血液制備的碳吸附過濾型血清制品，可用于細胞的體外培養(yǎng)。
血清是血液凝固后，在血漿中除去纖維蛋白原及某些凝血因子后分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白原已被除去的血漿。
其主要作用是提供基本營養(yǎng)物質(zhì)、提供激素和各種生長因子、提供結(jié)合蛋白、提供促接觸和生長因子使細胞貼壁免受機械損傷、對培養(yǎng)中的細胞起到某些保護作用。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機物等，這些物質(zhì)對促進細胞生長或抑制生長活性是達到生理平衡的。
碳吸附型血清是一款低水平類固醇類的血清產(chǎn)品，通過碳吸附可降低血清中許多激素及生長因子的濃度，如雌二醇、皮質(zhì)醇、皮質(zhì)酮、B類維生素、T3、T4、前列腺素等，該血清適用于上述一些分子可能干擾實驗結(jié)果的實驗中對于那些需要這些分子的細胞培養(yǎng)，可能降低細胞生長性能?；钚蕴磕軌蚪Y(jié)合脂溶性分子，因此能夠用來除去激素類物質(zhì)。
應(yīng)用[4][5]
用于兔原始生殖細胞（PGCs）體外培養(yǎng)條件優(yōu)化的研究
以14-18d胎兔為試驗對象,體外分離、培養(yǎng)、擴增PGCs,觀察PGCs的形態(tài)變化及集落形成的過程,用AKP染色及分子生物學(xué)等方法鑒定兔PGCs,并探索飼養(yǎng)層種類、血清含量、細胞因子等因素對兔PGCs分離培養(yǎng)的影響,這也為下一步的建系工作做出了鋪墊。
1. 本試驗選取昆明白近交系小鼠13-15d胎齡胎鼠和日本大耳白兔18-21d胎齡胎兔,體外分離培養(yǎng)其胚胎成纖維細胞,對不同代細胞凍存不同時間后進行復(fù)蘇并計算復(fù)蘇率、制作生長曲線。
得出以下結(jié)論:（1）小鼠、兔的P3代胚胎成纖維細胞生長活性優(yōu)良,結(jié)構(gòu)形態(tài)、生理功能穩(wěn)定,且傳至P3代的細胞被純化,更適合作為備用細胞使用;
（2）經(jīng)短時間（30d、60d）凍存的P1、P3代MEF和REF復(fù)蘇后其生長性能并沒有大幅度下降,而P3代相較P1來說細胞更純,因此可選用P3代MEF、REF短時間凍存,以便于后續(xù)試驗的需要。
2. 本試驗選用的是日本大耳白兔14-18d胎齡胎兔,無菌剝離生殖嵴,體外分離培養(yǎng)PGCs,并采用酶組織化學(xué)檢測堿性磷酸酶活性、RT-PCR檢測轉(zhuǎn)錄因子Oct-4的表達等方法對其進行鑒定,檢測結(jié)果呈陽性。將PGCs分別接種于MEF、REF制成的不同密度飼養(yǎng)層來確定種屬跟密度的最適宜培養(yǎng)條件;當(dāng)培養(yǎng)液中血清含量不同以及是否添加細胞因子LIF時,對于PGC培養(yǎng)的影響,并選出的方案。
得出以下結(jié)論:（1）在14-18d的兔胚胎生殖嵴中均可得到PGCs;
（3）兔原始生殖細胞接種于用兔胚胎成纖維細胞所制成的密度為6×104的飼養(yǎng)層上生長狀況、集落形態(tài)情況,分化速度較慢,此為飼養(yǎng)層的最適條件。
（3）優(yōu)化了培養(yǎng)方案,用此方案可得到更多的集落,且集落維持未分化狀態(tài)的時間更長,培養(yǎng)液成分:高糖DMEM+1%NEAA+1%雙抗+2mmol/L L-谷氨酰胺+0.1mmol/Lβ-巰基乙醇+20ng/mL LIF+15%FBS。
參考文獻
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[5]王亞丹.兔原始生殖細胞（PGCs）體外培養(yǎng)條件優(yōu)化的研究[D].河南農(nóng)業(yè)大學(xué),2017.