背景[1-3]
ADSC-GM SQ Kit是脂肪組織來(lái)源干細(xì)胞的專用培養(yǎng)基，用于脂肪組織來(lái)源干細(xì)胞的誘導(dǎo)和傳代培養(yǎng)。脂肪來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞(或稱基質(zhì)細(xì)胞),簡(jiǎn)稱為ADSC,主要存在于脂肪組織基質(zhì)血管成分(SVF)中。間充質(zhì)干細(xì)胞最早發(fā)現(xiàn)于骨髓,現(xiàn)已被證實(shí)存在于機(jī)體的多種組織器官中,是一群具有多向分化潛能的多能干細(xì)胞。
脂肪組織來(lái)源的干細(xì)胞(ADSCs)是由間充質(zhì)細(xì)胞發(fā)育而來(lái)。ADSCs在醫(yī)學(xué)和生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域有許多應(yīng)用，包括糖尿病的治療和組織再生。
脂肪細(xì)胞(脂肪組織)通過(guò)一系列信號(hào)和轉(zhuǎn)錄級(jí)聯(lián)從間充質(zhì)細(xì)胞發(fā)育。脂肪細(xì)胞的分化非常復(fù)雜，涉及細(xì)胞形態(tài)、激素敏感性和基因表達(dá)的變化。
ADSCs是來(lái)源于脂肪細(xì)胞的干細(xì)胞，可以分化成多種不同的細(xì)胞類型，但與胚胎干細(xì)胞(ESCs)和誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(iPSCs)相比更受限制。
ADSCs可以從脂肪細(xì)胞中分離出來(lái)，首先用磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)洗滌樣品，然后將樣品置于含有膠原酶和PBS的無(wú)菌培養(yǎng)板上。反復(fù)吸移樣品，然后離心，得到含有ADSCs和SVF的溶液。在加入各種其他化學(xué)物質(zhì)后再次離心，然后通過(guò)70μm的細(xì)胞過(guò)濾器過(guò)濾。
ADSCs用于再生醫(yī)學(xué)治療，因?yàn)樗鼈兛梢苑只筛鞣N不同的細(xì)胞譜系。這些干細(xì)胞還具有抗凋亡、抗炎、促血管生成、免疫調(diào)節(jié)和抗瘢痕作用，這使得它們非常有效。
由于ADSCs來(lái)源于間充質(zhì)細(xì)胞，它們主要用于組織再生，特別是在醫(yī)學(xué)的成骨、成脂、成軟骨和心血管領(lǐng)域。
應(yīng)用[4][5]
用于脂肪來(lái)源干細(xì)胞對(duì)肥胖相關(guān)炎癥及胰島素抵抗的作用及機(jī)制研究
通過(guò)建立肥胖模型,并對(duì)模型小鼠進(jìn)行ADSC干預(yù)治療,證實(shí)了ADSC能夠緩解肥胖誘發(fā)的慢性炎癥以及胰島素抵抗；并且通過(guò)體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)證明了ADSC通過(guò)促進(jìn)巨噬細(xì)胞向抑炎M2型轉(zhuǎn)化而抑制脂肪組織炎癥。這為ADSC作為免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞在臨床上治療肥胖和相關(guān)代謝疾病提供了新的思路。
方法：1.飲食誘導(dǎo)肥胖小鼠模型的建立8周齡C57BL/6雄性小鼠分別給予高脂飲食喂養(yǎng)或常規(guī)對(duì)照飲食喂養(yǎng)。造模喂養(yǎng)共進(jìn)行15周,期間每周進(jìn)行小鼠體重的監(jiān)測(cè),繪制成曲線。
2.脂肪來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞(ADSC)的分離、擴(kuò)增及鑒定剝離C57BL/6雄性小鼠附睪處脂肪組織,剪碎后加入含有Ⅰ型膠原酶的KRB緩沖液,37℃搖床中消化50分鐘。離心得到細(xì)胞沉淀,洗滌后過(guò)100μm銅網(wǎng)。濾過(guò)后的混懸液2000rpm,5min離心后棄上清。細(xì)胞沉淀即為含有ADSC的脂肪組織基質(zhì)細(xì)胞(SVF),可經(jīng)傳代培養(yǎng)進(jìn)行純化。用含有bFGF的DMEM培養(yǎng)基重懸SVF,37℃、5%CO2培養(yǎng),隔天換液一次。當(dāng)細(xì)胞匯合度達(dá)到80%時(shí)(約6天左右),可進(jìn)行傳代。第三代至五代的細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)的方式,檢測(cè)第三代ADSC表面CD105、CD90、CD44以及CD11b、CD34、MHC-Ⅱ分子的表達(dá)情況。
3.ADSC體內(nèi)示蹤及體內(nèi)干預(yù) ADSC的體內(nèi)示蹤第三代的ADSC在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期時(shí),在培養(yǎng)基中加入EdU培養(yǎng)24h。通過(guò)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行Apollo567及Hoechst染色檢測(cè)細(xì)胞標(biāo)記效率。將標(biāo)記效率高于90%的ADSC配制成1×106/ml的細(xì)胞懸液,注射于高脂喂養(yǎng)8周后的C57BL/6雄性小鼠。分別于注射后3天和7天后處死小鼠,取附睪處脂肪組織進(jìn)行EdU染色。熒光顯微鏡下觀察ADSC定位的情況。
ADSC的體內(nèi)干預(yù)小鼠高脂8周之后,開(kāi)始進(jìn)行ADSC干預(yù)治療。以7天為一個(gè)周期,分別進(jìn)行生理鹽水和ADSC細(xì)胞懸液的注射。注射方式采取腹腔注射途徑,注射量為體積為0.5ml的生理鹽水或含有1×106ADSC的細(xì)胞混懸液0.5ml。整個(gè)干預(yù)時(shí)長(zhǎng)6周。
參考文獻(xiàn)
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