背景[1-3]
大鼠星形膠質(zhì)細胞條件培養(yǎng)基-無血清RACM-SF是用無血清的星形膠質(zhì)細胞培養(yǎng)基從原代培養(yǎng)的大鼠星形膠質(zhì)細胞中制備的液體培養(yǎng)基。培養(yǎng)基經(jīng)過無菌過濾，在5%CO2/95%空氣的培養(yǎng)箱中平衡時，其pH值為7.4。無血清星形膠質(zhì)細胞條件培養(yǎng)基（ACM-sf）已廣泛應(yīng)用于培養(yǎng)神經(jīng)元和內(nèi)皮細胞。ACM也被證明可以保護神經(jīng)元免受皮質(zhì)酮誘導的損傷。
星形膠質(zhì)細胞是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中含量最豐富的細胞。星形膠質(zhì)細胞具有多種生物學功能，如支持參與血腦屏障形成的內(nèi)皮細胞，為神經(jīng)元提供營養(yǎng)，維持細胞外離子平衡，促進中樞神經(jīng)系統(tǒng)的修復。
星形膠質(zhì)細胞具有許多突起，伸展充填在神經(jīng)細胞的胞體及其突起之間，起支持和分隔神經(jīng)細胞的作用，并參與了血腦屏障的形成。由于星形膠質(zhì)細胞能產(chǎn)生和分泌某些神經(jīng)遞質(zhì)以及表達某些神經(jīng)遞質(zhì)受體，可對一些神經(jīng)活性物質(zhì)產(chǎn)生反應(yīng)。另外，星形膠質(zhì)細胞能對外源性化合物進行生物轉(zhuǎn)化，并可幫助調(diào)節(jié)神經(jīng)元周圍的離子微環(huán)境。
外源性化學物質(zhì)或外傷損傷中樞神經(jīng)系統(tǒng)后，損傷區(qū)域星形膠質(zhì)細胞通過增生可形成膠質(zhì)“瘢痕”。這種增殖多伴隨著膠質(zhì)纖維酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein，GFAP）的表達增加。因此組織中GFAP升高是中樞神經(jīng)系統(tǒng)對損傷作出反應(yīng)的一個標志性信號。
應(yīng)用[4][5]
用于糖氧剝奪/復氧復糖下大鼠星形膠質(zhì)細胞Cx43的變化及其機制研究
觀察大鼠星形膠質(zhì)細胞Cx43在糖氧剝奪/復氧復糖（ischemia/reperfusion;oxygen-glucose deprivation/reoxygenation;I/R）條件下數(shù)量和質(zhì)量方面的變化規(guī)律，并進一步探討其變化的機制。
方法：采用連續(xù)傳代法體外純化培養(yǎng)大鼠星形膠質(zhì)細胞，通過調(diào)節(jié)培養(yǎng)箱參數(shù)及更換無糖培養(yǎng)液建立其I/R模型。糖氧剝奪2h后，分別復氧復糖0.5h、1h、3h、6h、12h、24h、72h，采用Western blotting方法對Cx43進行定量分析，通過Western blotting及RT-PCR方法分析EB1在蛋白和基因表達量方面的變化。
使用MTT比色法選擇細胞損傷最重的時間點，設(shè)立正常培養(yǎng)組、I/R Saline對照組、I/R甘珀酸干預組，采用激光共聚焦顯微鏡觀察Cx43分布的變化；dynasore阻斷胞吞作用后，再次于激光共聚焦顯微鏡下觀察Cx43的分布變化。
同時，設(shè)立正常培養(yǎng)組、I/R組、I/R TPA組、I/R MG132組、I/R TPA+MG132組，采用Westernblotting方法對p-Cx43（Ser368）、p-ERK1/2、Beclin1蛋白進行定量分析。
結(jié)果：(1)成功建立了星形膠質(zhì)細胞純化體系及其糖氧剝奪/復氧復糖模型。
（2）Western blotting結(jié)果提示I/R后各個時間點的Cx43總量并未發(fā)生改變（P>0.05）。
（3）MTT法提示I/R后6h細胞受到的損傷最嚴重，此時使用激光共聚焦顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)Cx43發(fā)生了內(nèi)在化，即細胞膜上分布減少，而細胞質(zhì)內(nèi)分布增多(P<0.05)。
參考文獻
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