概述[1]
血紅蛋白，作為一種血液替代物，具有滲透活性和運(yùn)輸和傳遞氧的能力，但它具有通過(guò)腎路線和經(jīng)過(guò)血管壁的循環(huán)中迅速消除的缺點(diǎn)，導(dǎo)致一種很短的，因此，典型地不令人滿意的半衰期。進(jìn)一步地，人血紅蛋白也常常被有毒水平的內(nèi)毒素、細(xì)菌或病毒污染。
天然血紅蛋白通常在紅細(xì)胞內(nèi)主要起攜氧釋氧作用，供給機(jī)體氧氣的需要。血紅蛋白分子量為64.5KD，內(nèi)含四個(gè)亞基，兩個(gè)α亞基，兩個(gè)β亞基。Hb中每個(gè)亞基由肽鏈和一個(gè)血紅素(heme)分子組成，每個(gè)heme分子上有一個(gè)二價(jià)鐵。含二價(jià)鐵的血紅蛋白稱為亞鐵血紅蛋白，具有攜氧釋氧作用；其中結(jié)合氧的亞鐵血紅蛋白稱為氧合血紅蛋白(O2Hb)，未結(jié)合氧的亞鐵血紅蛋白稱為脫氧血紅蛋白(HHb)。亞鐵血紅蛋白容易被轉(zhuǎn)變成其他形式的血紅蛋白，如被氧化后形成高鐵血紅蛋白(metHb)(二價(jià)鐵被氧化成三價(jià)鐵的血紅蛋白)、與CO結(jié)合形成碳氧血紅蛋白(COHb)、與硫化物結(jié)合形成硫化血紅蛋白(SHb)等等。未強(qiáng)調(diào)是哪種血紅蛋白類型的，通常都是指氧合血紅蛋白。
血紅蛋白氧載體主要目的是克服血紅蛋白本身的腎毒性，代替紅細(xì)胞攜氧釋氧的功能。目前主要應(yīng)用于急性失血病人的緊急救治或是在紅細(xì)胞不可獲得的情況下代替紅細(xì)胞使用，使用劑量都較大，需要通過(guò)靜脈給藥。
血紅蛋白滅活病毒[2]
步驟1：在一可密閉容器中加入10mg/mL的豬血紅蛋白80mL，再加入10ml豬偽狂犬病毒（PRV），攪拌，在溶液上方通入氮?dú)?，再將蛋白溶液用氣體交換膜進(jìn)行脫氧處理，液相一側(cè)接溶液，氣相一側(cè)通入氮?dú)猓瑢嗚F血紅蛋白轉(zhuǎn)化成脫氧血紅蛋白，待轉(zhuǎn)化率大于95%并且溶液中的氧分壓低于2mmHg時(shí)進(jìn)行步驟2；
步驟2：加入10mL10%連二亞硫酸鈉，使其終濃度達(dá)到1%，反應(yīng)1.5h，去除殘余的氧；
步驟3：逐滴加入0.5mol/L鹽酸，使溶液pH逐漸降低至4.0左右，停止通入氮?dú)?，密封容器，阻止容器?nèi)部與大氣交換；
步驟4：在15℃條件下，攪拌21天；
步驟5：逐滴加入0.5mol/L氫氧化鈉，使溶液pH升至7.5，打開(kāi)容器；
步驟6：以氯化鈉為透析液，充分透析上述溶液，收集得到的蛋白溶液即為滅活病毒后的蛋白溶液。
檢測(cè)方法[3]
血紅蛋白的檢測(cè)方法包括：硫酸銅滴定法進(jìn)行血紅蛋白測(cè)定，或者采用進(jìn)口大型生化分析儀進(jìn)行測(cè)定。前者存在自行配制誤差大、易受環(huán)境溫度影響等缺點(diǎn),后者儀器價(jià)格昂貴,測(cè)試成本高。國(guó)外常用的測(cè)試方法為試劑盒和干式生化分析法,試劑盒法需要大型生化分析儀,干式生化分析法產(chǎn)品主要有德國(guó)的Re-flotronⅣ型全血干式生化分析儀和瑞典的SWELAB血液分析儀,采用的均是波長(zhǎng)比色法,所需采血量較大,測(cè)試時(shí)間長(zhǎng),成本高。
免疫層析膠體金技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)是微創(chuàng)取樣，取樣量少，成本低，檢測(cè)快，準(zhǔn)確度高，適用于現(xiàn)場(chǎng)及家庭檢測(cè)，而目前市場(chǎng)上未出現(xiàn)免疫層析技術(shù)檢測(cè)血紅蛋白含量的產(chǎn)品，其技術(shù)難點(diǎn)在于血紅蛋白雙抗體夾心存在HOOK效應(yīng)，因此目前免疫層析雙抗體技術(shù)還是主要集中在潛血，隱血的檢測(cè)項(xiàng)目中。
Hook效應(yīng)是指在雙位點(diǎn)夾心免疫試驗(yàn)中，其劑量反應(yīng)曲線的高劑量區(qū)段，線性走向不是呈平臺(tái)狀無(wú)限后延，而是向下彎曲狀，此現(xiàn)象稱之為HOOK效應(yīng)。目前對(duì)于血紅蛋白的免疫學(xué)檢測(cè)，一般需要多步稀釋才能使其處于線性范圍內(nèi)，但這樣造成的誤差勢(shì)必會(huì)加大。
主要參考資料
[1] 周翔海, & 紀(jì)立農(nóng). (2005). 空腹血糖和糖化血紅蛋白用于篩查糖尿病的研究. 中國(guó)糖尿病雜志, 13(3), 203-205.
[2] 黃應(yīng)平, 蔡汝秀, HuangYingping, & CAIRuXiu. (2001). 血紅蛋白作為過(guò)氧化物模擬酶催化顯色體系的研究與應(yīng)用. 分析化學(xué), 49(4), 378-382.
[3] 王全林, 劉志洪, 蔡汝秀, & 呂功煊. (2003). 血紅蛋白的過(guò)氧化物酶催化特性研究. 化學(xué)學(xué)報(bào), 61(1), 34-39.