今天分享新型免疫抑制劑-他克莫司特異性雜質穩(wěn)定性研究。他克莫司(Tacrolimus)，又名FK506，是從鏈霉菌屬中分離出的發(fā)酵產物，是一種大環(huán)內酯類藥物，為一種強力的新型免疫抑制劑，主要通過抑制白介素-2(IL-2)的釋放，全面抑制T淋巴細胞的作用，較環(huán)孢素(CsA)強100倍。近年來，作為肝、腎移植的一線用藥，已在日本、美國等14個國家上市。臨床實驗表明，其在心、肺、腸、骨髓等移植中應用有很好的療效。同時FK506在治療特應性皮炎(AD)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)、自身免疫性眼病等自身免疫性疾病中也發(fā)揮著積極的作用。
在本次實驗中，我中心參照《歐洲藥典》11.0版“TACROLIMUS MONOHYDRATE“品種項”Related substances“項下色譜條件對他克莫司的2個特定雜質進行了溶液穩(wěn)定性研究，所用樣品貨號及結構式如下圖1和圖2：
圖1：本次研究所用雜質貨號及結構式
圖2：標準收錄的雜質代碼和本次研究所用雜質貨號對應關系圖
在本次實驗中，實驗員將RM-T031201(EP雜質A; Ascomycin; Tacrolimus EP Impurity A; CAS NO: 104987-12-4)和RM-T031205(EP雜質I; Tacrolimus Diene; Tacrolimus EP Impurity I; CAS NO: 104987-16-8)各取適量，分別放置在酸性、中性和堿性溶液中，分別于常溫常壓下放置0、3、6、12、24小時后參照《歐洲藥典》11.0版“TACROLIMUS MONOHYDRATE“品種項”Related substances“項下色譜條件進樣檢測。觀測隨著樣品溶液放置時間的延長，色譜圖中主峰峰面積的變化，以此為根據(jù)來確定樣品的溶液穩(wěn)定性。
經(jīng)過檢測發(fā)現(xiàn)樣品RM-T031201(EP雜質A)和RM-T031205(EP雜質I)在酸性和中性溶液中放置24小時的過程中主峰峰面積變化不大，相對標準偏差均小于2.0%。所以可以認為這兩個樣品在酸性和中性溶液中放置24小時的過程中是比較穩(wěn)定的。但經(jīng)過檢測發(fā)現(xiàn)樣品RM-T031201(EP雜質A)和RM-T031205(EP雜質I)在堿性溶液中放置24小時的過程中主峰峰面積變化較大，相對標準偏差分別為58.58%和43.19%。實驗員匯總整理了兩個樣品在酸性、中性和堿性溶液中放置24個小時的過程中的取樣檢測數(shù)據(jù)，制作了樣品主峰峰面積隨放置時間的變化折線圖及立體對比圖，如下圖3-圖6所示。
從圖3和圖4可以看出，與樣品RM-T031201(EP雜質A)在中性溶液中放置0小時的檢測圖譜相比，該樣品在堿性溶液中放置0小時的檢測圖譜顯示，主峰峰面積要小很多，而且有其他雜質存在。說明該樣品在用堿性溶液配制過程中已經(jīng)發(fā)生降解。而從圖3中可以看出樣品RM-T031201(EP雜質A)在堿性溶液中放置3小時過程中降解較快，在堿性溶液中放置3小時后，樣品不再降解。從圖5和圖6可以看出，與樣品RM-T031205(EP雜質I)在中性溶液中放置0小時的檢測圖譜相比，該樣品在堿性溶液中放置0小時的檢測圖譜顯示，主峰峰面積要小很多，而且有其他雜質存在。說明該樣品在用堿性溶液配制過程中已經(jīng)發(fā)生降解。而從圖5中可以看出樣品RM-T031205(EP雜質I)在堿性溶液中放置3小時過程中降解較快，在堿性溶液中放置3小時后，樣品還會繼續(xù)緩慢降解。
圖3：樣品RM-T031201(EP雜質A)在酸性、中性和堿性溶液中放置24小時的溶液穩(wěn)定性數(shù)據(jù)匯總折線圖
圖4：樣品RM-T031201(EP雜質A)的堿性溶液穩(wěn)定性數(shù)據(jù)立體對比圖
圖5：樣品RM-T031205(EP雜質I)在酸性、中性和堿性中放置24小時的溶液穩(wěn)定性數(shù)據(jù)匯總折線圖
圖6：樣品RM-T031205(EP雜質I)的堿性溶液穩(wěn)定性數(shù)據(jù)立體對比圖
綜上所述，通過本次實驗，我們發(fā)現(xiàn)樣品RM-T031201(EP雜質A)和RM-T031205(EP雜質I)在酸性和中性溶液中穩(wěn)定性都很好。以上兩個樣品在用堿性溶液配樣過程中就會發(fā)生部分降解，并且在檢測過程中還會持續(xù)降解。所以客戶在檢測樣品RM-T031201(EP雜質A)和RM-T031205(EP雜質I)時，應避免使用堿性稀釋劑，在使用、儲存和運輸過程中也不能碰堿。如果客戶對這2個樣品的穩(wěn)定性內容有需要，可以向本公司咨詢。
