背景及概述[1][2]
磷酸肌酸激酶簡稱CPK。主要分布在骨骼肌和心肌，在腦組織和平滑肌等亦含有少量。正常人血清內(nèi)也僅含少量肌酸磷酸激酶。但在某些疾病時，血中可有大量肌酸磷酸激酶出現(xiàn)。例如，兒童心肌炎時明顯升高。
又稱肌酸激酶(creatine kinase)。CPK是一種器官特異性酶，主要存在于骨骼肌、心肌和腦組織。CPK主要催化肌肉中磷酸肌酸(CP)與二磷酸腺苷(ADP)合成肌酸(C)和三磷酸腺苷(ATP)的生化反應(yīng)。正常豬血清CPK含量較低，但豬在應(yīng)激狀態(tài)下由于肌細(xì)胞受損，可導(dǎo)致血液中CPK含量和活性的升高。因此CPK常用作評定豬應(yīng)激綜合征的指標(biāo)依據(jù)之一。CPK測定有多種方法，常用的方法有Antonik法，測定結(jié)果在30單位/ml以下為陰性，31單位/ml以上為陽性;此外，還有Siqma法，測定結(jié)果在100單位/ml以下為陰性，101～200單位/ml為陽性。
測定方法[3]
肌酸激酶(CK)主要存在于骨骼肌和心肌，在腦組織中也有存在。下列情 況可使CK活性增高：急性心肌梗塞后2～4小時開始增高，可高達(dá)正常上限的 10～12倍，2～4天恢復(fù)正常。測定CK對心肌梗塞的診斷優(yōu)于AST、LD等；病毒性 心肌炎明顯升高，對其診斷和預(yù)后有參考價值；腦血管意外、腦膜炎、甲狀腺 功能低下患者；劇烈運(yùn)動、各種插管和手術(shù)、肌肉注射冬眠靈和抗生素等。
現(xiàn)在普遍使用的測定血清中肌酸激酶的方法為比色法，該法是利用CK催化 磷酸肌酸(CrP)與二磷酸腺苷(ADP)反應(yīng)生成三磷酸腺苷(ATP)與肌酸(Cr)， 己糖激酶(HK)催化葡萄糖與ATP反應(yīng)，形成葡萄糖-6-磷酸，葡萄糖-6-磷酸 脫氫酶催化葡萄糖-6-磷酸氧化，形成6-磷酸葡萄糖內(nèi)酯及NADPH，NADPH生成 的速率代表CK活力。
CN200610115000.1提供一種靈敏度高、線性范圍寬、方便、安全的血清中肌酸激酶的化學(xué)發(fā)光測定方法。解決該技術(shù)問題采用的主要技術(shù)方案：血清中肌酸激酶的化學(xué)發(fā)光測定方法，其特征在于利用CK催化磷酸肌酸(CrP)與二磷酸腺苷(ADP)反應(yīng)生成三磷酸腺苷(ATP)與肌酸(Cr)；再用甘油激酶(GK)催化三磷酸腺苷(ATP)及甘油生成3-磷酸甘油(G-3-P)；3-磷酸甘油(G-3-P)被磷酸甘油氧化酶(GPO)氧化，并產(chǎn)生過氧化氫；再經(jīng)過氧化物酶作用，過氧化氫使化學(xué)發(fā)光物氧化而發(fā)光；光信號的大小與肌酸激酶的濃度呈正相關(guān)，即肌酸激酶濃度越大發(fā)出的光信號越強(qiáng)；記錄這種光信號即可推測肌酸激酶的濃度；用已知濃度的肌酸激酶與測出的光信號，作出劑量-反應(yīng)曲線；未知樣品的肌酸激酶含量可從該曲線推算出來；所述的化學(xué)發(fā)光物為魯米諾。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比有如下優(yōu)點：用化學(xué)發(fā)光物代替顯色物，達(dá)到更靈敏、更穩(wěn)定、范圍寬、更安全的目的。用該方法可以制備相應(yīng)的定量測定血清中肌酸激酶的商品試劑盒。
具體優(yōu)點是：①靈敏 度更高。傳統(tǒng)方法是檢測顏色深淺，而化學(xué)發(fā)光是測光信號，可一個一個光子計數(shù)，所測的最低限更小，因而靈敏度更高。②線性范圍寬。測顏色的深淺的分辨率比光子計數(shù)的精度要低得多，化學(xué)發(fā)光的檢測范圍高達(dá)105。③安全適用?；瘜W(xué)發(fā)光物如魯米諾等很安全，整個檢測過程無有害物出現(xiàn)，無論是檢測或處理廢物都很安全，有利于環(huán)境保護(hù)。④便于普及。
本發(fā)明所制備的試劑盒，可用于全自動測量，也可用于手工或半自動測量，適宜大、中、小各層次的醫(yī)療和研究機(jī)構(gòu)使用。⑤巨大的社會效益。用化學(xué)發(fā)光法測定生化指標(biāo)或免疫物質(zhì)，可同用一臺化學(xué)發(fā)光儀，不再需要進(jìn)口昂貴的生化儀，節(jié)省大量資金，不只降低了成本，對醫(yī)療機(jī)構(gòu)、患者及社會均大有益處。
固定方法[2]
CN201210232877.4提出了一種肌酸激酶固定化的方法。它以殼聚糖為原料，先制備出交聯(lián)殼聚糖溶液，再制備出交聯(lián)殼聚糖微球，然后制備出接枝賴氨酸交聯(lián)殼聚糖樹脂，最后以接枝賴氨酸交聯(lián)殼聚糖樹脂為載體固定化肌酸激酶。本發(fā)明的優(yōu)點可以使用常規(guī)的生產(chǎn)設(shè)備在溫和的條件下生產(chǎn)磷酸肌酸，工藝簡單，操作簡便且易于控制，生產(chǎn)成本低，提高了生產(chǎn)效率，生產(chǎn)過程有利于保護(hù)環(huán)境；且制備的固定化肌酸激酶對熱、酸、堿、有機(jī)溶劑等條件的穩(wěn)定性都有顯著增加。
主要參考資料
[1] 養(yǎng)豬詞典
[2] 兒科學(xué)辭典
[3] CN200610115000.1 血清中肌酸激酶的化學(xué)發(fā)光測定方法
[4] CN201210232877.4一種肌酸激酶固定化的方法