介紹

固紫 B的分子式為(C15H14N3O2)2·ZnCl4，外觀為黃色結(jié)晶性粉末，可溶于極性及非極性溶劑。分子結(jié)構(gòu)中含有三個(gè)偶氮基團(tuán)（-N=N-），這些基團(tuán)是染料的發(fā)色團(tuán)，負(fù)責(zé)吸收特定波長(zhǎng)的光，從而賦予染料顏色的特性。兩個(gè)固紫 B分子通過(guò)鋅離子（Zn2+）形成絡(luò)合物，鋅離子與四個(gè)氯離子（Cl?）配位，形成穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)。

固紫 B

應(yīng)用

固紫 B作為一種偶氮染料，在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域有著重要的應(yīng)用，尤其是在細(xì)胞化學(xué)染色方面。本文將詳細(xì)闡述其在骨髓基質(zhì)細(xì)胞（BMSC）染色中的應(yīng)用，以及其在臨床診斷中的價(jià)值。

染色法的建立

固紫 B染色法的建立是為了更好地識(shí)別和計(jì)數(shù)骨髓基質(zhì)細(xì)胞（BMSC）。BMSC是一類(lèi)具有高度增殖、自我更新及多向分化潛能的細(xì)胞，在細(xì)胞與基因治療中有著廣闊的應(yīng)用前景。然而，BMSC在骨髓中的含量非常少，每(0.1—1.0)×10^6個(gè)有核細(xì)胞中僅有1個(gè)基質(zhì)細(xì)胞，傳統(tǒng)的Wright-Giemsa染色后其形態(tài)不夠顯目，難以準(zhǔn)確識(shí)別。為了克服這一問(wèn)題，研究者們建立了固紫B鹽細(xì)胞化學(xué)染色法。該方法通過(guò)優(yōu)化固定液種類(lèi)、固定時(shí)間、pH值、染色時(shí)間及緩沖液等參數(shù)，最終確定了使用pH 7.2—7.6的PBS緩沖液進(jìn)行染色，使BMSC胞質(zhì)染成紫紅色，而胞核不著色，其他細(xì)胞（如粒細(xì)胞、紅細(xì)胞、巨核細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞、間皮細(xì)胞等）均不染色。

染色操作步驟

第一步標(biāo)本采集：吸取患者骨髓、胸腔積液或腹腔積液50μl制成涂片。健康對(duì)照者骨髓液2ml，采用Percoll密度梯度分離法分離并培養(yǎng)BMSC，細(xì)胞按1:3比例傳代，傳代培養(yǎng)4代后用胰酶消化，洗滌，得單個(gè)核細(xì)胞懸液，約3×10^6/ml，室溫下560×g離心5min，棄上清液，細(xì)胞沉淀混勻，推片。

第二步固定：將新鮮干燥標(biāo)本于固定液（95%乙醇溶液345ml，40%甲醛溶液55ml，蒸餾水10ml混合而成）固定30s，小水流沖洗后晾干。

第三步染色：將固定后的標(biāo)本置入1g/L固紫 B的PBS溶液（pH 7.2—7.6），37℃水浴箱內(nèi)置30min，流水沖洗1min，晾干后蘇木精復(fù)染2min，流水沖洗，待干。

第四步鏡下觀察：在顯微鏡下觀察細(xì)胞的著色情況及陽(yáng)性BMSC形態(tài)特征，并計(jì)數(shù)貧血組、健康對(duì)照組和隨機(jī)雙盲法選取的150份骨髓標(biāo)本全片的BMSC陽(yáng)性數(shù)。

臨床應(yīng)用價(jià)值

研究發(fā)現(xiàn)，AA組BMSC計(jì)數(shù)為(1.07±0.29)個(gè)，增生性貧血組為(2.26±0.37)個(gè)，健康對(duì)照組為(1.58±0.33)個(gè)，AA組BMSC計(jì)數(shù)明顯低于增生性貧血組和健康對(duì)照組（q值分別為24.29、8.83，P均<0.01），健康對(duì)照組低于增生性貧血組（q=16.41，P<0.01）。以健康對(duì)照組BMSC數(shù)的下限值作為AA的診斷界點(diǎn)，該方法診斷AA的敏感度為90%，特異度為93%，陽(yáng)性似然比為12.86，陰性似然比為0.11。在一般的貧血患者中，BMSC數(shù)與骨髓增生程度有關(guān)，造血旺盛型BMSC數(shù)多于造血減低型。固紫 B染色法可以快速、準(zhǔn)確地計(jì)數(shù)BMSC，從而評(píng)估骨髓的增生程度，對(duì)貧血的鑒別診斷具有重要的臨床價(jià)值。

固紫B染色法的優(yōu)勢(shì)

整個(gè)操作過(guò)程僅需30分鐘，染色明顯，對(duì)陳舊標(biāo)本也易著色，染色液配置后可較長(zhǎng)時(shí)間保存，染色結(jié)果保留數(shù)月也不褪色。固紫 B染色后BMSC胞核不著色，胞質(zhì)豐富，呈紫紅色，而其他細(xì)胞均無(wú)此染色特征。與經(jīng)典的流式細(xì)胞儀分析法比較發(fā)現(xiàn)，流式細(xì)胞儀法分類(lèi)具有CD105/CD106/CD146細(xì)胞表面標(biāo)記特征的細(xì)胞，固紫 B染色也呈陽(yáng)性，表明它對(duì)BMSC染色具有較高的特異性。與流式細(xì)胞儀分析法、免疫細(xì)胞化學(xué)染色、熒光標(biāo)記法等相比，固紫 B染色法成本低廉，易于在基層醫(yī)院推廣[1]。

參考文獻(xiàn)

[1]GONG XU-BO,吳先國(guó),盧興國(guó),等. 骨髓基質(zhì)細(xì)胞固紫B鹽染色法的建立及其臨床意義[J]. 中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2008,31(8):890-893.