背景及概述^[1][2]

關(guān)附甲素是中藥毛茛科黃花烏頭中的主要活性物質(zhì)之一。臨床前藥理研究表明：鹽酸關(guān)附甲素可對抗高鈣、結(jié)扎冠狀動脈及烏頭堿誘發(fā)的室性心動過速和心室顫動，并可對抗乙酰膽堿誘發(fā)的心房撲動和心房顫動；可濃度依賴性降低對心肌快反應(yīng)動作電位的Vmax。膜片鉗全細(xì)胞法證明該藥物抑制快反應(yīng)心肌細(xì)胞的Na⁺內(nèi)流為主的多離子通道作用，是一個(gè)較好的抗心率失常的天然產(chǎn)物。大量臨床數(shù)據(jù)表明，鹽酸關(guān)附甲素是治療陣發(fā)性室上心動過速和室性心率失常的有效藥物，療效肯定，不良反應(yīng)少且輕微，為首次發(fā)現(xiàn)的全新結(jié)構(gòu)類型的安全、有效的廣譜抗心率失常西藥一類原創(chuàng)新藥。

制備^[1]

2kg關(guān)白附藥材，粉碎，以60L0.5%（w/w）鹽酸滲漉提取48小時(shí)， 提取液吸附于8L001×7陽離子交換樹脂，取出樹脂，晾干，樹脂以濃氨水 堿化至pH為9，堿化后的樹脂以15L氯仿和甲醇（5:1）混合溶劑回流提取3次，提取液濃縮后加入草酸至pH為1，沉淀，過濾，沉淀以水調(diào)成糊狀，濃氨水堿化至pH為8，50℃干燥，再以30ml異丙醇復(fù)溶，靜置析晶， 得粗晶，粗晶以異丙醇-丙酮（1:2）重結(jié)晶，過濾，干燥，得到關(guān)附甲素 5.8g，收率2.9‰，純度98.6%。

制劑^[2]

關(guān)附甲素凍干乳劑，是一種將藥物溶于油中，再在水中乳化分散成300～400nm的微粒，冷凍干燥成穩(wěn)定的凍干粉，在給藥前加入注射用水復(fù)溶后靜脈給藥的制劑。它是以關(guān)附甲素為活性成分，再加上藥學(xué)上常用的注射用油、乳化劑、附加劑、凍干保護(hù)劑而成，其中凍干乳制劑各組分的重量份含量為：

關(guān)附甲素      0.02～0.14份

注射用油      0.01～2份

乳化劑        0.01～0.6份

附加劑        0.001～0.05份

凍干保護(hù)劑    0.05～1份。

一種制備權(quán)利關(guān)附甲素凍干乳劑的方法，包括如下步驟：

1)將關(guān)附甲素溶于注射用油中，作為油相；

2)乳化劑、附加劑和凍干保護(hù)劑溶于注射用水中；

3)將油相加入水相中，以8000～10000轉(zhuǎn)/分鐘高速分散后，以一級閥1000～1500bar、二級閥150～300bar高壓均質(zhì)得到均勻分散的乳液；其中高壓均質(zhì)后的乳液的粒徑需達(dá)到150～250nm；

4)乳液過濾滅菌后，在-40～-15℃預(yù)凍6～12小時(shí)，再以0.1～1℃/min速度升溫冷凍干燥10～24小時(shí)。

本發(fā)明涉及的凍干乳劑復(fù)溶成液體乳劑后，粒徑可控制在300～400nm之間，實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證在該粒徑范圍內(nèi)，乳劑復(fù)溶液在體內(nèi)具有動力學(xué)行為：的血藥濃度曲線下面積，最長的平均駐留時(shí)間。

應(yīng)用^[3-4]

注射關(guān)附甲素后，觀察到坐骨神經(jīng)慢性壓迫性損傷大鼠的機(jī)械痛和熱敏痛閾值升高，表明關(guān)附甲素可降低神經(jīng)病理痛模型大鼠的痛行為、改善感覺神經(jīng)的損傷現(xiàn)象。關(guān)附甲素處理后同時(shí)可下調(diào)神經(jīng)病理痛模型組大鼠背根神經(jīng)節(jié)P2Y受體的表達(dá)及膠質(zhì)纖維酸性蛋白的共表達(dá)。關(guān)附甲素可降低模型大鼠背根神經(jīng)節(jié)腫瘤壞死因子、磷酸化P38有絲分裂原激活的蛋白激酶蛋白的表達(dá)。因此，關(guān)附甲素可能通過降低神經(jīng)病理痛模型大鼠背根神經(jīng)節(jié)衛(wèi)星膠質(zhì)細(xì)胞P2Y受體的表達(dá)、抑制背根神經(jīng)節(jié)P2Y受體介導(dǎo)的炎性傷害性信息傳遞，減輕坐骨神經(jīng)壓迫性損傷所致的神經(jīng)病理痛大鼠的痛行為。

歐陽松等人應(yīng)用微電極陣(MEA)技術(shù)研究關(guān)附甲素(GFA)對兔心室肌晚鈉電流(INaL)及興奮傳導(dǎo)速度(ECV)的影響。方法:新西蘭大白兔64只，隨機(jī)分成4組:對照組(8只)，GFA組(1、3、10μmol/L，每種濃度各8只)，?？舅亟M(ATXⅡ，8只)，ATXⅡ+GFA組(1、3、10μmol/L，每種濃度各8只)。開胸取出心臟后進(jìn)行l(wèi)angendroff灌流，用柔性電極貼附左心室，記錄各項(xiàng)電生理信號的變化。

結(jié)果:與對照組相比，GFA 1μmol/L組、3μmol/L組、10μmol/L組心室肌場電位時(shí)限(fAPD)分別縮短至(338.88±10.93)、(327.13±11.57)、(314.25±9.38)ms(P<0.05)，ECV分別減慢至(0.51±0.10)、(0.38±0.11)、(0.25±0.07)m/s(P<0.05);ATXⅡ組fAPD明顯延長(P<0.05)，ECV則無明顯變化(P>0.05)。與ATXⅡ組相比，ATXⅡ+GFA 1μmol/L組、3μmol/L組、10μmol/L組心室肌fAPD分別縮短至(349.38±11.67)、(330.88±11.09)、(318.50±11.05)ms(P<0.05)，ECV分別減慢至(0.51±0.10)、(0.41±0.08)、(0.30±0.07)m/s(P<0.05)，其fAPD縮短率明顯高于GFA組。結(jié)論:GFA具有抑制INaL與減緩ECV的作用，可能為其抗心律失常的主要機(jī)制。

主要參考資料

[1] CN201310097092.5 一種關(guān)附甲素及其鹽的制備方法

[2] CN200910264208.3 關(guān)附甲素凍干乳劑及其制備方法

[3] CN201811137226.0 關(guān)附甲素在制備神經(jīng)病理痛藥物中的應(yīng)用

[4]歐陽松，張曉雅，侯月梅.關(guān)附甲素對兔心室肌晚鈉電流及興奮傳導(dǎo)速度的影響[J].臨床心血管病雜志，2016，32(12):1250-1253.