糜蛋白酶是一種能夠分解蛋白質(zhì)的消化性酶，活性基團(tuán)為絲氨酸，故屬于絲氨酸蛋白酶。胰凝乳蛋白酶在酪氨酸、色氨酸和苯丙氨酸（都是芳香族氨基酸）的羧基處切斷肽鍵，從而裂解蛋白質(zhì)。

作用

胰凝乳蛋白酶是在哺乳動(dòng)物及其他動(dòng)物體內(nèi)的消化系統(tǒng)中發(fā)揮作用。它是通過(guò)催化一個(gè)水解反應(yīng)（在沒(méi)有酶催化的情況下，反應(yīng)速度非常慢）來(lái)剪切肽鍵。胰凝乳蛋白酶的偏好底物包括酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸以及亮氨酸和甲硫氨酸。與其他蛋白酶相似，胰凝乳蛋白酶也可以在體外水解酯鍵；因此可以用一些底物類似物，如N-乙酰-L-酪氨酸對(duì)硝基苯酯，來(lái)作為酶反應(yīng)試劑。

生理學(xué)功能

糜蛋白酶屬絲氨酸蛋白酶家族，生理學(xué)功能包括攝食蛋白的消化、血液凝固、免疫反應(yīng)、信號(hào)傳導(dǎo)、激素活化和發(fā)育，其在昆蟲(chóng)幼蟲(chóng)中腸大量表達(dá)，參與攝食蛋白的消化。有研究顯示，鱗翅類昆蟲(chóng)中腸絲氨酸蛋白酶可降解其體內(nèi)病原體蘇云金桿菌的伴孢晶體蛋白，從而抵抗蘇云金桿菌對(duì)昆蟲(chóng)的殺傷力。

純化工藝

一種糜蛋白酶的純化工藝，其特征在于包括以下步驟：

（1）取牛胰，將脂肪、結(jié)締組織除去，絞碎成胰漿；

（2）向胰漿中加入硫酸溶液進(jìn)行提取，過(guò)濾；

（3）濾液中加入硫酸銨至0.4飽和度，冷室中放置過(guò)夜；

（4）過(guò)濾，濾液用截留分子量50kDa的超濾膜進(jìn)行超濾；

（5）濾出液用截留分子量5-10kDa的超濾膜進(jìn)行超濾；

（6）截留液加硫酸銨至0.7飽和度，低溫放置過(guò)夜；

（7）過(guò)濾，將濾餅溶于冷純化水中，冷純化水的體積數(shù)為濾餅質(zhì)量數(shù)的3-5倍，加硫酸調(diào)pH為2.0，攪拌使溶解，加入飽和硫酸銨溶液，飽和硫酸銨溶液的體積數(shù)為濾餅質(zhì)量數(shù)的2倍，調(diào)pH至5.0，25℃，孵育2-5h，有晶體析出，過(guò)濾收集晶體；

（8）晶體用冷純化水加硫酸溶解，冷純化水的體積數(shù)為晶體質(zhì)量數(shù)的3-5倍，調(diào)節(jié)pH 7.6，加入胰蛋白酶，20℃活化2-4h ；

（9）調(diào)節(jié)pH 至4.0，加入固體硫酸銨使達(dá)0.7飽和度，過(guò)濾收集沉淀；

（10）沉淀用冷純化水加硫酸溶解，用截留分子量10kDa的超濾膜進(jìn)行超濾；

（11）將上述超濾脫鹽的料液加至已用0.05mol/L NaAC 緩沖液平衡好的SP離子交換柱上，用3倍柱體積的含0.2 mol/L NaCl 的緩沖液洗柱，用3倍柱體積的含0.4 mol/L NaCl 的緩沖液洗脫得洗脫液；

（12）將上述洗脫液用截留分子量10-30kDa的超濾膜進(jìn)行超濾，除菌，既得。

參考文獻(xiàn)

CN102618523B