背景[1-7]
Rab9 Rabbit Monoclonal Antibody(Rab9兔單克隆抗體)是Rab9作為抗原對兔進行免疫后篩選出只產(chǎn)生的Rab9抗體的B淋巴細胞，再將B細胞通過細胞融合技術(shù)與骨髓瘤雜交然后篩選出只分泌Rab9抗體的雜交瘤細胞，最后通過層析柱純化制的高純度的Rab9抗體兔單克隆抗體。Rab蛋白是單體GTP酶Ras超家族中的亞家族，定位在胞內(nèi)復(fù)合物膜表面。Rab蛋白家族作為分子開關(guān)控制囊泡轉(zhuǎn)運，對生物合成、內(nèi)吞、分泌、細胞分化和細胞生長至關(guān)重要。
Rab蛋白功能障礙將會導(dǎo)致免疫缺陷、癌癥和神經(jīng)系統(tǒng)疾病等疾病。Rab9主要定位在晚期胞內(nèi)體，調(diào)節(jié)甘露糖-6-磷酸受體(M6PRs)從晚期胞內(nèi)體到高爾基網(wǎng)的反向回收轉(zhuǎn)運。在果蠅中利用ends-out同源重組基因打靶的方法敲除Rab9基因。發(fā)現(xiàn)Rab9基因敲除的果蠅純合突變體致死，致死期在三齡幼蟲時期。
部分Rab9敲除果蠅有黑色素瘤表型并伴隨著Toll信號通路的激活，Rab9缺失可以激活果蠅天然免疫反應(yīng)。Rab9缺失可以影響果蠅神經(jīng)突觸生長，rab9純合突變體果蠅三齡幼蟲神經(jīng)肌肉接頭過度生長以及果蠅神經(jīng)突觸pMAd染色水平升高。另外，Vps35是retromer復(fù)合物中組件，發(fā)現(xiàn)rab9突變體表型和vps35突變體有表型一致的地方，Rab9與Retromer缺失都會引起果蠅免疫反應(yīng)的激活，影響果蠅生長神經(jīng)生長。
Rab9是Rab家族成員之一，調(diào)節(jié)從晚期內(nèi)體到高爾基網(wǎng)的囊泡轉(zhuǎn)運。細胞內(nèi)脂質(zhì)沉積是C型尼曼-皮克病的一個重要特征，TLRs是一類重要的模式識別受體,天然免疫細胞通過識別病原微生物中保守的病原體相關(guān)分子模式,產(chǎn)生細胞因子和趨化因子,啟動天然免疫應(yīng)答,從而構(gòu)成了機體免疫反應(yīng)的道防線。然而,TLRs的活化異常或者過分活化,可能使自身免疫疾病惡化,產(chǎn)生如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、內(nèi)毒素休克和自身免疫等疾病。因此,TLRs信號通路的活化必須得到嚴密控制。
應(yīng)用[8][9]
Rab9兔單克隆抗體可用于Rab9信號通路研究：
用分子生物學(xué)技術(shù)構(gòu)建pCDH1-MCF1-RAB9-EF1-copGFP表達質(zhì)粒，然后用脂質(zhì)體介導(dǎo)法將慢病毒包裝系統(tǒng)的pPACKH1-GAG、pPACKH1-REV、pVSV-G和攜帶目的基因的載體pCDH1-MCF1-RAB9-EF1-copGFP共同轉(zhuǎn)染到293T包裝細胞內(nèi)包裝病毒，采用包裝成功的病毒感染小膠質(zhì)細胞（BV-2），72小時后，觀察目的基因（GFP為報告基因）的表達。同時，將包裝好的病毒注入BalB／c鼠小腦，4周后采用Western-blot檢測Lenti-Rab9的表達水平。
結(jié)果凝膠電泳和DNA測序證明Rab9 cDNA成功導(dǎo)入慢病毒載體pCDH1-MCF1-EF1-copGFP，感染小膠質(zhì)細胞（BV-2）72小時后，BV-2細胞中可見EGFP的表達。將包裝產(chǎn)生的病毒注入BalB／c鼠小腦，4周后Western-blot分析顯示：BalB／c鼠小腦Rab9表達明顯升高，證明編碼Rab9 cDNA的慢病毒包裝成功，該病毒能明顯增加Rab9的表達量。結(jié)論結(jié)果表明攜帶Rab9 cDNA的重組慢病毒包裝獲得成功。
該病毒能明顯增加Rab9的表達，它可能成為一種新的治療神經(jīng)系統(tǒng)變性病的手段。攜帶Rab9 cDNA的重組慢病毒對C型尼曼-皮克病小鼠神經(jīng)病理的影響目的觀察npc-／-小鼠生后三天內(nèi)經(jīng)雙側(cè)側(cè)腦室注射攜帶Rab9 cDNA的Lentivirus對C型尼曼-皮克病（NPC）小鼠神經(jīng)病理的影響。
方法①經(jīng)雙側(cè)側(cè)腦室途徑給生后三天內(nèi)的npc-／-小鼠注射攜帶Rab9 cDNA的Lentivirus。②通過HE染色、免疫組織化學(xué)及免疫印跡方法評估病毒注射后的npc-／-小鼠的神經(jīng)病理變化。結(jié)果①攜帶Rab9 cDNA的Lentivirus能廣泛感染npc-／-小鼠，介導(dǎo)Rab9在腦中表達。②攜帶Rab9 cDNA的Lentivirus明顯延緩浦肯野細胞的脫失、減少npc-／-小鼠軸突球狀體的數(shù)量。③攜帶Rab9 cDNA的Lentivirus使磷酸化的神經(jīng)絲蛋白（由SMI31識別）、磷酸化的Tau蛋白（由CP-13識別）和有絲分裂相關(guān)蛋白（由MPM-2識別）明顯降低，總Tau蛋白（由TG-5識別）沒有變化。
結(jié)論雙側(cè)側(cè)腦室注射攜帶Rab9 cDNA的Lentivirus能減輕npc-／-小鼠的神經(jīng)元細胞骨架病變，對npc-／-小鼠有保護作用，Rab9有可能成為值得開發(fā)的治療NPC的新靶標。
參考文獻
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