背景^[1-3]

類桿菌膽汁七葉苷瓊脂主要用于脆弱擬桿菌群的分離培養(yǎng)。

檢驗(yàn)原理：

胰蛋白胨、大豆胨提供細(xì)菌生長(zhǎng)的基本營(yíng)養(yǎng)；氯化鈉維持滲透壓；較高含量的牛膽粉可抑制革蘭氏陽性菌的生長(zhǎng)，并能與氯化血紅素一同促進(jìn)脆弱擬桿菌的生長(zhǎng)；慶大霉素為光譜抗生素，對(duì)多數(shù)腸桿菌、假單胞菌、葡萄球菌、鏈球菌、芽孢桿菌等有較強(qiáng)的抗菌活性，可抑制多數(shù)雜菌的生長(zhǎng)，可促進(jìn)脆弱擬桿菌的生長(zhǎng)；瓊脂為凝固劑；七葉苷和檸檬酸鐵銨為指示劑，脆弱擬桿菌可分解七葉苷生成七葉素，與檸檬酸鐵銨反應(yīng)變黑，使菌落呈現(xiàn)棕黑色。

類桿菌膽汁七葉苷瓊脂

類桿菌膽汁七葉苷瓊脂配制方法：

1.稱取61.6 g培養(yǎng)基，加蒸餾水至1 L，攪拌均勻，pH值

調(diào)節(jié)至7.0±0.2；

2.121℃高溫滅菌15 min或115℃高溫滅菌20 min；

3.固體培養(yǎng)基冷卻到50-60℃，傾倒平皿，4℃避光保存?zhèn)溆谩?/p>

類桿菌膽汁七葉苷瓊脂使用注意事項(xiàng)：

1.注意無菌操作，避免微生物污染。

2.根據(jù)菌株生長(zhǎng)特性，可適當(dāng)調(diào)整pH值。

3.該培養(yǎng)基僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其它用途。

4.稱量時(shí)注意粉塵，佩戴口罩操作以避免引起呼吸道系統(tǒng)不適。

5.干粉培養(yǎng)基使用后立即旋緊瓶蓋，避免吸潮結(jié)塊。未開封產(chǎn)品保質(zhì)期三年，開封后根據(jù)存放條件的不同保質(zhì)時(shí)間存在一定的差異。

應(yīng)用^[4][5]

類桿菌膽汁七葉苷瓊脂可以用于雞源主要腸球菌快速檢測(cè)方法的建立

腸球菌作為一種重要的條件致病菌,可引起多種動(dòng)物和人感染,以雞最為敏感,尤其以雛雞最為嚴(yán)重?？梢痣r雞生長(zhǎng)抑制、心內(nèi)膜炎、敗血癥、腦軟化、骨髓炎等疾病,給養(yǎng)雞業(yè)帶來了嚴(yán)重的損失。因此,探究雞感染腸球菌種類及其毒力,建立雞源主要腸球菌的快速檢測(cè)方法,可應(yīng)用于雞腸球菌病和雛雞及雞胚早期感染的防治。為探究鶉雞腸球菌和小腸腸球菌感染情況,采集1日齡病、弱雛雞,進(jìn)行大體剖檢和病理切片顯微觀察病理變化。肝臟分離純化細(xì)菌,對(duì)分離株進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察、生化鑒定,提取其DNA對(duì)16S rDNA基因序列進(jìn)行PCR擴(kuò)增、測(cè)序、比對(duì)進(jìn)行鑒定。結(jié)果顯示病、弱雛雞腹部偏大、臍部出血,剖檢可見肝臟呈土黃色,卵黃吸收不良;鏡檢可見肺臟充血;肝臟組織充血、淤血,充滿空泡。分離株在營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上,菌落細(xì)小;在類桿菌膽汁七葉苷瓊脂上,培養(yǎng)基呈棕黑色;革蘭染色為陽性球菌;生化試驗(yàn)結(jié)果符合腸球菌的特點(diǎn);結(jié)合16S rDNA基因序列比對(duì)分析,鑒定分離株EH-1為小腸腸球菌,分離株EG-1、EG-2為鶉雞腸球菌。較早在國(guó)內(nèi)確定了雞的小腸腸球菌和鶉雞腸球菌感染。為弄清不同種腸球菌毒力強(qiáng)弱及毒力基因攜帶情況。以PCR方法對(duì)4株腸球菌的6種毒力基因進(jìn)行檢測(cè),并進(jìn)行雞胚致病性試驗(yàn),對(duì)3株腸球菌進(jìn)行毒力分析。結(jié)果顯示分離株EG-1僅檢測(cè)出ace基因;分離株EH-1和EG-2未檢測(cè)出6種毒力基因;屎腸球菌Efm-1檢測(cè)出efa A、asal、ace、gel E共4種毒力基因;雞胚尿囊腔接菌后,存活雞胚未發(fā)現(xiàn)明顯病變,死亡雞胚有明顯的充血和出血病變。鶉雞腸球菌、小腸腸球菌、屎腸球菌的半數(shù)致死量分別為9.33×10～4CFU、6.10×10～6CFU、1.31×10～6CFU。提示不同種腸球菌其毒力基因攜帶數(shù)量、種類均有差異,且3種腸球菌致病性均較弱,其毒力基因攜帶情況與毒力未發(fā)現(xiàn)有明顯的關(guān)聯(lián)性。

參考文獻(xiàn)

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