背景技術(shù)

N-Fmoc-N'-三苯甲基-D-谷氨酰胺是固相接肽中常用的試劑，我們可以通過較簡單的方法以D-谷氨酰胺為初始原料來合成(ref:Tetrahedron lett;EN;32;6;1991;739-742)，即2-D-Gln-OH經(jīng)三步反應(yīng)得到產(chǎn)物，但由于產(chǎn)率比較低且D-Gln原料市場(chǎng)價(jià)格昂貴，而D-Glu價(jià)格則相對(duì)便宜很多，下是我們從這個(gè)角度出發(fā)介紹了N-Fmoc-N'-三苯甲基-D-谷氨酰胺合成方法。

制備方法^[1]

1、D-谷氨酸與Z-Cl(芐氧羰基氯)反應(yīng)得到Z-D-Glu-OH(N-芐氧羰基-D-谷氨酸)，Z-D-Glu-OH在有機(jī)溶劑N,N-二甲基甲酰胺中，在三乙胺，溴芐的存在下，選擇性的保護(hù)α-羧基，得到Z-D-Glu-OBzl(N-芐氧羰基-D-谷氨酸芐酯)。

2、Z-D-Glu-OBzl在有機(jī)溶劑中，加入三乙胺、氯甲酸乙酯、氨水(摩爾比:1:1:2~6),在-20~20℃反應(yīng)6~24小時(shí)后得到2-D-Gln-OBzl(N-芐氧羰基-D-谷氨酰胺芐酯)。有機(jī)溶劑為四氫呋喃或乙酸乙酯;

3、Z-D-Gln-OBzl的醋酸溶液在濃硫酸催化下與三苯甲醇反應(yīng)，在45~60℃反應(yīng)8~24小時(shí)得到Z-D-Gln(Trt)-OBzl(N-芐氧羰基-N-三苯甲基-D-谷氨酰胺芐酯)；

4、Z-D-Gln(Trt)-OBzl氫化脫去Z基團(tuán)和Bzl基團(tuán)，得到D-Gln(Trt)-OH(N-三苯甲基-D-谷氨酰胺)。脫去Z-、Bzl-保護(hù)用10%鈀碳、5%鈀碳中的一種和氫氣、環(huán)己烯中的一種;

5、D-Gln(Trt)-OH(N-三苯甲基-D-谷氨酰胺)上Fmoc保護(hù)基得到N-Fmoc-N'-三苯甲基-D-谷氨酰胺。

應(yīng)用

專利CN202180071425.X介紹了新型的靶向CXCR4的化合物的制備，其中，環(huán)[Phe?Tyr?Lys(iPr)?D?Arg?2Nal?D?Gln?D?Glu]?Lys(iPr)(18)的合成，在90℃，用20％v/v哌啶在DMF中的溶液對(duì)Fmoc?Rink Amide MBHA樹脂(CEM，0.56mmol/g)脫保護(hù)1min，兩次，并用3mL DMF清洗5次。然后將Fmoc?Lys(iPr，Boc)?OH綴合至Rink Amide MBHA樹脂。在90℃，用20％v/v哌啶在DMF中的溶液移除Fmoc基團(tuán)1min。在每次脫保護(hù)后，用3mL DMF清洗樹脂三次。按照類似程序，將Fmoc?D?Glu(OAll)?OH、N-Fmoc-N'-三苯甲基-D-谷氨酰胺(偶聯(lián)兩次)、Fmoc?2?Nal?OH(偶聯(lián)兩次)、Fmoc?D?Arg(Pbf)?OH(偶聯(lián)兩次)、Fmoc?Lys(iPr，Boc)?OH、Fmoc?Tyr(tBu)?OH和Fmoc?Phe?OH(偶聯(lián)兩次)依次偶聯(lián)至肽基樹脂。使用Pd(PPh3)4(20mg)/苯基硅烷(300μL)脫除D?Glu，上的?O烯丙基保護(hù)基(2×6min，35℃)。然后，除去Phe上的Nα?Fmoc，并使用DIC/HOBt在DMF中進(jìn)行環(huán)化(3×10min，在90℃)。環(huán)化后，對(duì)肽脫保護(hù)，并同時(shí)通過在35℃，用92.5/5/2.5TFA/TIS/H2O的混合溶液處理3h從樹脂切下肽。過濾后，真空除去TFA并通過添加冷二乙醚沉淀肽。通過制備HPLC純化粗肽^[2]。

參考文獻(xiàn)

[1]吉爾生化(上海)有限公司. 一種 N－芴甲氧羰基－N－三苯甲基－D－谷氨酰胺的合成法:CN200710036268.0[P]. 2008-07-16. 

[2]省衛(wèi)生服務(wù)機(jī)構(gòu),英屬哥倫比亞大學(xué). 新型的靶向CXCR4的化合物:CN202180071425.X[P]. 2023-07-18.