糖原染色是病理學(xué)中常規(guī)的染色方法之一,McManus在1946年最先使用高碘酸-雪夫(PAS)技術(shù)顯示黏蛋白,該法常用來(lái)顯示糖原和其他多糖,但卻不能區(qū)別黏蛋白和糖原。若要準(zhǔn)確鑒別黏液物質(zhì)(如黏蛋白或糖原),需加入糖原消化步驟;大多數(shù)情況下可用淀粉酶溶液來(lái)催化糖原的糖苷鍵水解,形成水溶性的雙糖-麥芽糖,在應(yīng)用PAS技術(shù)之前將糖原從組織切片上除去。
用法
兩張相同切片,二甲苯或脫蠟透明液脫蠟,梯度乙醇入水。一張切片入37℃淀粉酶溶液處理1h;另一張不用淀粉酶溶液處理,入水中1h作為對(duì)照。流水沖洗兩張切片各5~10min。進(jìn)行糖原PAS染色步驟。
染色結(jié)果
糖原、中性唾液黏蛋白:紅紫色
各種糖蛋白:紅紫色
細(xì)胞核:藍(lán)色
未處理的切片,糖原呈亮紅色或紅紫色;淀粉酶處理的切片,糖原陰性。
注意事項(xiàng)
1. 切片脫蠟應(yīng)盡量干凈,否則影響染色效果。
2. 最好使用一張陽(yáng)性對(duì)照片驗(yàn)證酶的活性。
3. 避免接觸過(guò)多的陽(yáng)光和空氣,使用前最好提前取出恢復(fù)到在室溫后,避光暗處使用。
4. 冷凍切片染色時(shí)間盡量要短。
5. 淀粉酶溶液開封后請(qǐng)盡快使用,以防影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)效果。