簡介
D-松二糖是一種天然存在于蜂蜜中的還原性二糖，由一分子葡萄糖和一分子果糖以α-1,3糖苷鍵連接形成，是蔗糖的同分異構(gòu)體，甜度為蔗糖的一半。D-松二糖具有容易結(jié)晶、高度可溶、水解速率慢，不會被致齲微生物發(fā)酵等特點(diǎn)，適合肥胖癥、高血脂、高血壓、糖尿病等人群食用。在食品工業(yè)中具有廣闊的應(yīng)用前景，具有代替蔗糖成為新型功能性甜味劑的潛力。此外，D-松二糖還可以廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、化妝品等領(lǐng)域，是一種高附加值的產(chǎn)品。
測定方法
步驟1、內(nèi)標(biāo)物儲備液的制備：準(zhǔn)確稱量鄰苯二甲酸氫鉀0.5g，置于5mL容量瓶中，加水定容至刻度，渦旋并超聲均勻，制成1mL含100mg內(nèi)標(biāo)物的儲備液；
步驟2、D-松二糖對照品溶液的制備：
(1)精密稱取D-松二糖標(biāo)準(zhǔn)品100mg，置于5mL容量瓶中，用1mol/L KH2PO4緩沖液定容至5mL，渦旋均勻，制成每1mL中含20mgD-松二糖的儲備液；
(2)分別精密吸取D-松二糖儲備液100 -1500ul，各置于5mL容量瓶中，分別依次加入含內(nèi)標(biāo)物10mg的內(nèi)標(biāo)物儲備液100ul、1mol/L HCl 200uL，用1mol/L KH2PO4緩沖液定容至刻度，渦旋均勻，分別制得每1mL中含D-松二糖對照品2-30mg的系列對照品溶液；
步驟3、樣品溶液的制備：精密稱取蜂蜜樣品1g，置于5mL量瓶中，依次加入含內(nèi)標(biāo)物10mg的內(nèi)標(biāo)物儲備液100uL、1mol/L HCl 200uL，用1mol/L KH2PO4緩沖液溶解并定容至刻度，渦旋均勻，作為樣品溶液；
步驟4、蜂蜜樣品中D-松二糖的含量測定：分別吸取步驟2制備的系列D-松二糖對照品溶液及步驟3制備的樣品溶液900ul，各加入含質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%的2,2,3,3-四氘代三甲基硅烷丙烯酸和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.015%疊氮化鈉的重水溶液100ul，渦旋均勻，各取600ul裝入核磁管待測；
步驟5、核磁氫譜測定條件：脈沖程序?yàn)閚oesygpprld；01=4.7-4.8；NS=32；DS=4；D1=4s；TD=65536；SWH=8196.722Hz；TE=300.1K；
步驟6、蜂蜜樣品中D-松二糖的含量計(jì)算：分別得到D-松二糖系列對照品溶液和樣品溶液的核磁氫譜，在保持原始譜圖不放大的前提下，分別將譜圖中TSP位移設(shè)置為0，然后進(jìn)行自動相位和基線校正，并設(shè)定各譜圖中內(nèi)標(biāo)鄰苯二甲酸氫鉀在7.814ppm左右的多重峰的面積為1，分別記錄對照品溶液中D-松二糖在5.30ppm左右的峰面積與樣品溶液中D-松二糖在5.30ppm左右的峰面積，以系列對照品溶液譜圖中D-松二糖在5.30ppm左右的峰面積為縱坐標(biāo)，以D-松二糖含量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程，由樣品溶液譜圖中D-松二糖在5.30ppm左右的峰面積推算樣品溶液中D-松二糖含量(mg/g)。
參考文獻(xiàn)
[1]江蘇中譜檢測有限公司. 一種利用核磁氫譜法測定蜂蜜中松二糖含量的方法:CN202010810005.6[P]. 2020-11-27.