背景^[1-3]

MFC培養(yǎng)基是一種用于檢測水中糞大腸菌群的特定培養(yǎng)基。

MFC培養(yǎng)基，全稱為Membrane Filtration Culture medium，是一種發(fā)酵型的培養(yǎng)基，主要用于生活飲用水及其水源水中糞大腸菌群的測定。它的工作原理是基于特定的細(xì)菌在MFC培養(yǎng)基中能夠分解乳糖產(chǎn)生酸性物質(zhì)，從而引起培養(yǎng)基pH值的變化，使得菌落顯現(xiàn)出特定的顏色變化，通常是亮藍(lán)色，以此作為檢測的指標(biāo)。

MFC培養(yǎng)基的配方通常包含胰胨、多胨、酵母膏粉、乳糖、3號(hào)膽鹽、瓊脂、玫紅酸和苯胺藍(lán)等成分。這些成分共同作用，使得培養(yǎng)基具有分離和培養(yǎng)革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌的能力。質(zhì)控菌包括大腸埃希氏菌、鼠傷寒沙門氏菌、福氏志賀氏菌等，這些菌株在MFC培養(yǎng)基中的生長情況可以作為培養(yǎng)基性能的指標(biāo)。

在使用時(shí)，MFC培養(yǎng)基通常與濾膜法結(jié)合使用，即將待測水樣通過濾膜過濾，然后將濾膜放置在MFC培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，以便觀察是否有糞大腸菌群的生長。

MFC培養(yǎng)基

MFC培養(yǎng)基是一種特定類型的培養(yǎng)基，其特性和應(yīng)用主要如下：

特性：MFC培養(yǎng)基是一種基本無機(jī)鹽和簡單有機(jī)物組成的培養(yǎng)基，具有低營養(yǎng)成分，適用于菌絲狀真菌的生長和繁殖。同時(shí)，MFC培養(yǎng)基中添加了微生物特異性酶顯色底物，具有高特異性和靈敏度。其反應(yīng)靈敏度和特異性優(yōu)于傳統(tǒng)培養(yǎng)基，并且簡便、快速、技術(shù)要求低，結(jié)果通常在18~24小時(shí)內(nèi)出現(xiàn)。

應(yīng)用：MFC培養(yǎng)基常用于研究真菌的生理特性、代謝途徑和抗生素產(chǎn)生等方面，也可用于真菌的鑒定和分類。例如，MFC肉湯培養(yǎng)基可以用于硫酸鏈霉素等抗生素的無菌檢查。MFC培養(yǎng)基的顯色原理使得觀察菌落顏色即可對(duì)菌種作出鑒定，特別適用于監(jiān)測大批量的樣本中微生物的篩選與鑒定。

應(yīng)用^[4][5]

MFC培養(yǎng)基可以用于枯草芽孢桿菌B25抗真菌活性物質(zhì)的部分特性分析及分離純化

對(duì)芽孢桿菌B25的生理生化進(jìn)行了較詳細(xì)鑒定,對(duì)發(fā)酵培養(yǎng)基組分和發(fā)酵條件進(jìn)行了優(yōu)化,分析了抗真菌活性物質(zhì)的部分理化性質(zhì),并對(duì)抗真菌活性物質(zhì)進(jìn)行了分離純化和抗菌活性蛋白的鑒定,本研究將為拮抗活性物質(zhì)的開發(fā)應(yīng)用及菌株的進(jìn)一步遺傳改良打下基礎(chǔ)。

所作工作如下：采用API50CHB芽孢桿菌生化鑒定系統(tǒng)對(duì)芽孢桿菌B25進(jìn)行生化鑒定,鑒定結(jié)果與以前的一致均為枯草芽孢桿菌。以香蕉枯萎病菌為指示菌,分別在LB和MFC培養(yǎng)基這兩種不同培養(yǎng)基中接種枯草芽孢桿菌B25,并對(duì)其上清液活性進(jìn)行活性檢測。

結(jié)果表明：拮抗菌B25在LB培養(yǎng)基中生長繁殖速度快,但其上清液抑菌活性差,MFC培養(yǎng)基培養(yǎng)基中繁殖速度相比而言較慢,上清液抑菌活性較好；同時(shí)發(fā)現(xiàn)拮抗菌B25抗真菌活性物質(zhì)是在對(duì)數(shù)期后期開始產(chǎn)生的,穩(wěn)定期活性上升到最大值并一直保持在這個(gè)水平。為提高枯草芽孢桿菌B25活性物質(zhì)的產(chǎn)量,通過單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),對(duì)枯草芽孢桿菌B25進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)基以及發(fā)酵條件的優(yōu)化。

單因素實(shí)驗(yàn)表明：葡萄糖為比較適合的外加碳源,牛肉浸膏以及細(xì)菌學(xué)蛋白胨都是比較理想的外加氮源,無機(jī)鹽則選擇KH2PO4;經(jīng)優(yōu)化后的培養(yǎng)基配方為：葡萄糖1.5%,細(xì)菌學(xué)蛋白胨1.5%,牛肉浸膏0.5%,KH2PO41%；最適發(fā)酵條件為：初始pH7、溫度28℃、裝液量60mL/250mL。利用乙醇沉淀法、乙酸乙酯萃取、硫酸銨沉淀法對(duì)活性物質(zhì)進(jìn)行提取,發(fā)現(xiàn)乙醇沉淀法和乙酸乙酯萃取法均不能提取到活性抗菌物質(zhì),只有硫酸銨沉淀法可以將其提取出來,并確定硫酸銨的飽和度為75%。對(duì)抗真菌活性物質(zhì)的部分理化性質(zhì)進(jìn)行分析研究,分別分析了抗菌活性物質(zhì)對(duì)溫度、pH和蛋白酶(胰蛋白酶、蛋白酶K)的敏感；對(duì)抗真菌活性物質(zhì)的分子量進(jìn)行估計(jì),用10kDa的超濾管超濾；用特殊培養(yǎng)基(MFC培養(yǎng)基、蛋白培養(yǎng)基、纖維素培養(yǎng)基、幾丁質(zhì)培養(yǎng)基)檢測活性液中活性物質(zhì)的分解情況。

參考文獻(xiàn)

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