微生物培養(yǎng)基是微生物檢測中的重要組成部分。在過去實(shí)驗(yàn)室往往是自制培養(yǎng)基使用,但是隨著社會(huì)的發(fā)展,現(xiàn)在大多數(shù)的實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)完全用商品化培養(yǎng)基代替了自制,這樣一來大大減少了工作量并且保證了質(zhì)量的穩(wěn)定。但是我們作為使用者,依然需要對(duì)培養(yǎng)基的基本成分的作用機(jī)理進(jìn)行了解。
微生物生長所需要的營養(yǎng)物質(zhì)
微生物生長所需要的營養(yǎng)物質(zhì)主要以相對(duì)應(yīng)的有機(jī)物與無機(jī)物的形式存在。這些營養(yǎng)物質(zhì)按照它們?cè)谖⑸餀C(jī)體中的生理作用不同,區(qū)分成碳源、氮源、能源、生長因子、無機(jī)鹽和水六大類。
其中,化能異養(yǎng)型微生物的能源和碳源都來自于有機(jī)物,利用有機(jī)物的氧化分解產(chǎn)生能量進(jìn)行生長。
化能自養(yǎng)型微生物以二氧化碳為碳源,利用無機(jī)化合物氧化過程中釋放出的能量進(jìn)行生長。
孟加拉紅培養(yǎng)基的成分分析
霉菌酵母菌計(jì)數(shù)常用的培養(yǎng)基是孟加拉紅(虎紅)培養(yǎng)基,其中加入了一定量的氯霉素可有有效地抑制絕大多數(shù)細(xì)菌菌落的生長。
以檢測霉菌酵母菌的孟加拉紅培養(yǎng)基為例:
對(duì)于具體成分的分析:
1、瓊脂(agar):一種多糖分子化合物,(C12H18O9)n,膠體,冷卻至40℃開始逐漸凝固,在微生物培養(yǎng)基中被用作凝固劑,來改變培養(yǎng)基的物理性狀(固體或半固體),其本身不被細(xì)菌分解利用,也無營養(yǎng)作用。
2、水分,微生物需水量隨種類不同而不同,而它們的繁殖與培養(yǎng)基中的水分活性有關(guān),水分活性越低,繁殖越差,一旦水分活性低于某種水平時(shí),整個(gè)繁殖就停止。因此配置培養(yǎng)基時(shí),水分與培養(yǎng)基配比要準(zhǔn)確,傾注平板的量不宜過少。
3、為避免培養(yǎng)基PH變化對(duì)微生物生長造成影響,需要在培養(yǎng)基中加入緩沖劑。培養(yǎng)基的pH必須控制在合適的范圍內(nèi),以滿足不同類型微生物的需要。
例如,酵母菌和霉菌生長所需的適宜pH在3.8~6.0范圍,但是,隨著營養(yǎng)物質(zhì)被逐漸分解,微生物不停的生長繁殖和代謝,培養(yǎng)基的pH會(huì)開始變化,因此,為了維持培養(yǎng)基pH的相對(duì)恒定,通常在培養(yǎng)基中加入pH緩沖劑,如上述的磷酸二氫鉀。磷酸二氫鉀呈弱酸性,當(dāng)培養(yǎng)基中堿性物質(zhì)積累導(dǎo)致OH-濃度增加時(shí),OH-則與弱酸性鹽結(jié)合形成弱堿性化合物,培養(yǎng)基pH就不會(huì)過度升高。
4、注意各種營養(yǎng)物質(zhì)的濃度與配比(如碳氮比),營養(yǎng)物質(zhì)濃度過低時(shí)不能滿足微生物正常生長所需,濃度過高時(shí)則可能對(duì)微生物生長起抑制作用。以葡萄糖為例,低濃度時(shí),隨著劑量的增加甚至可以干擾某些抑菌劑的抑菌作用,但是高濃度時(shí),反而會(huì)起到抑菌效果。
5、抑菌成分的抑菌作用并非百分之百,因?yàn)楸仨毧紤]到高濃度的抑菌劑的效果會(huì)“不分?jǐn)澄摇?,所以在這種情況下采用抑制非目標(biāo)菌的劑量往往不會(huì)最優(yōu)。
孟加拉紅培養(yǎng)基中的氯霉素,并不能完全抑制細(xì)菌的生長,少量種類的細(xì)菌會(huì)在孟加拉紅培養(yǎng)基上生長良好,并且會(huì)通過孟加拉紅的染色成為粉紅色,外觀上與酵母菌無異。所以當(dāng)我們檢測食品時(shí)發(fā)現(xiàn)了“酵母菌”,請(qǐng)不要忘記做鏡檢確認(rèn)。