綠色植物利用葉綠素進(jìn)行光合作用，葉綠素主要有葉綠素A和葉綠素B兩種，屬于合成天然低分子有機(jī)化合物，不溶于水，而溶于有機(jī)溶劑，如乙醇、丙酮、乙醚、氯仿等。葉綠素A是水質(zhì)參數(shù)中的重要生物指標(biāo)，本文將介紹檢測(cè)水中葉綠素A的意義以及方法。

水中的葉綠素A

葉綠素A可直接反映水體中藻類的生長(zhǎng)情況，含量高，則藻類多，含量低，則藻類少。過(guò)多的藻類使得水體透明度和溶解氧降低，影響水表面下生物進(jìn)行光合作用，造成水質(zhì)惡化，加速水體老化，是促使水體富營(yíng)養(yǎng)化的重要原因。因此，葉綠素A是反映水體富營(yíng)養(yǎng)化的重要指標(biāo)，測(cè)定水體中葉綠素A的濃度，對(duì)控制水體富營(yíng)養(yǎng)化程度，恢復(fù)水環(huán)境功效具有重要的作用。當(dāng)水體中葉綠素A的濃度在25～500ug/L時(shí)，可作為水體富營(yíng)養(yǎng)化的依據(jù)之一。

對(duì)水體中藻類及其它浮游植物葉綠素A的測(cè)定，目前方法眾多，一般使用較多的為研磨法，該方法需要將過(guò)濾、冷凍后的植物組織加入適量90％丙酮，而后充分研磨，在研磨過(guò)程中易造成組織中葉綠素的流失，而丙酮對(duì)人體有一定的毒性且常溫下萃取效率較低，使得測(cè)定的葉綠素A偏低，不利于評(píng)測(cè)水體富營(yíng)養(yǎng)化程度。

方法進(jìn)展

為了解決上述問(wèn)題，專利 CN101858857A 提供了一種新的富營(yíng)養(yǎng)化水體中浮游植物葉綠素A的分析測(cè)定方法，將傳統(tǒng)的研磨法的主要工序加以改進(jìn)，摒棄研磨工序，使用熱乙醇替代丙醇，引入水浴和超聲工序，提高葉綠素提取和萃取效率，從而達(dá)到高效準(zhǔn)確測(cè)定富營(yíng)養(yǎng)化水體中葉綠素A的目的。步驟如下：

(1)樣品的前處理：按照傳統(tǒng)的檢測(cè)水體中浮游植物的葉綠素的取樣方法采集水樣，將200～500ml的水樣通過(guò)抽濾器抽濾，將抽濾后的濾膜以及附著于其上的浮游植物置于10～25mL具塞離心管中，然后放入-18℃冰箱中冷凍6～8小時(shí)；

(2)樣品的萃?。簭谋淙〕霾襟E(1)的具塞離心管恢復(fù)至室溫狀態(tài)后，向離心管中加入10mL 80℃的90％乙醇，于80℃水浴2min后，于超聲波清洗機(jī)內(nèi)超聲10min，然后避光靜置萃取3～5h后以4000r/min的轉(zhuǎn)速離心10min，取上清液待測(cè)；

(3)上清液的測(cè)定及水體中浮游植物葉綠素A的濃度計(jì)算：取步驟(2)所得上清液在分光光度計(jì)上測(cè)定上清液的葉綠素A的吸光度；首先以90％乙醇作空白吸光度測(cè)定，對(duì)上清液吸光度進(jìn)行校正；而后開(kāi)始測(cè)定上清液的吸光度，先在665nm波長(zhǎng)測(cè)上清液吸光系數(shù)E665，再在750nm波長(zhǎng)測(cè)上清液吸光系數(shù)E750，然后在裝有上清液的比色皿中加入0.1～0.2毫升1.0mol/L鹽酸進(jìn)行酸化，加蓋搖勻，靜置1min后重新在665nm波長(zhǎng)測(cè)定經(jīng)過(guò)酸化處理后的上清液的吸光系數(shù)A665，再在750nm波長(zhǎng)測(cè)其吸光系數(shù)A750，計(jì)算水體中浮游植物葉綠素A。