背景[1-3]
細胞周期與細胞凋亡檢測試劑盒是一種用于檢測細胞周期和細胞凋亡的生物試劑，通常包含用于染色的熒光染料和用于流式細胞儀檢測的緩沖液等成分。
細胞周期是指細胞從前一次分裂結束起到下一次分裂結束為止的活動過程，通常由G0/G1期、S期、G2期和M期組成。細胞凋亡則是指細胞程序性死亡的過程。
細胞周期與細胞凋亡檢測試劑盒利用了細胞內DNA能夠和熒光染料結合的特性。在細胞各個時期，其DNA含量不同，因此結合的熒光染料也不同。流式細胞儀可以檢測熒光強度，從而確定細胞周期各個階段的DNA分布狀態(tài)，計算出各個期的百分含量。
使用細胞周期與細胞凋亡檢測試劑盒可以同時檢測細胞周期和細胞凋亡，從而更好地了解細胞的增殖和死亡情況，有助于研究腫瘤、免疫系統等領域中的細胞生物學過程。
細胞周期與細胞凋亡
細胞周期與細胞凋亡檢測試劑盒是一種用于研究細胞周期和細胞凋亡的試劑盒。該試劑盒通常包括以下成分：
細胞周期檢測試劑：包括PI染料、RNase A等，用于染色細胞并分析細胞周期。
細胞凋亡檢測試劑：包括Annexin V-FITC/PI雙染料、Caspase-3底物等，用于檢測細胞凋亡。
培養(yǎng)基：提供細胞生長所需的營養(yǎng)物質。
其他輔助試劑：如緩沖液、離心管、移液器等。
使用該試劑盒時，首先需要收集細胞樣本，并將其加入到含有培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中進行培養(yǎng)。然后，根據試劑盒說明書中的步驟，加入相應的試劑進行染色和分析。通過觀察染色結果和數據分析，可以了解細胞周期和細胞凋亡的情況，為進一步的研究提供基礎數據。
應用[4-5]
細胞周期與細胞凋亡檢測試劑盒可以用于DHA對脂肪細胞凋亡調控作用機制研究
以3T3-L1脂肪細胞為模型探討DHA對前體脂肪細胞和成熟脂肪細胞凋亡的影響及其機制,為應用DHA進行肥胖的防治提供科學依據。
方法3T3-L1前脂肪細胞常規(guī)培養(yǎng),MTT法檢測DHA處理24、48、72h對3T3-L1前脂肪細胞活力的影響,流式細胞術檢測DHA作用24h對前脂肪細胞周期的影響,細胞周期與細胞凋亡檢測試劑盒Hoechst染色法觀察DHA處理24h對前脂肪細胞凋亡的影響,線粒體膜電位JC-1染色法檢測DHA處理24h前脂肪細胞線粒體膜電位的改變,蛋白免疫印跡法檢測DHA處理對前脂肪細胞中p-ERK1/2、p21、Bcl-2、Bax和p53蛋白水平的影響,試劑盒法檢測DHA處理后前脂肪細胞凋亡效應因子Caspase 3的活性變化,從而探討DHA對前脂肪細胞凋亡的影響及其作用機制。
MDI法誘導前體脂肪細胞分化為成熟脂肪細胞并進行以下檢測:MTT法檢測DHA處理對成熟脂肪細胞活力的影響,油紅O染色法測定DHA處理48h對成熟脂肪細胞脂質含量的影響,細胞周期與細胞凋亡檢測試劑盒Hoechst染色法觀察DHA處理48h對成熟脂肪細胞凋亡的影響,JC-1染色法檢測DHA處理24h成熟脂肪細胞線粒體膜電位的改變,蛋白免疫印跡法檢測DHA處理對成熟脂肪細胞凋亡相關蛋白Akt、p-Akt、CREB、ERK1/2、p-ERK1/2、Bcl-2、Bax和Bad水平的影響,試劑盒法檢測DHA處理48h對成熟脂肪細胞凋亡效應因子Caspase 3活性的影響,從而研究DHA對成熟脂肪細胞凋亡的影響及其作用機制。
結果MTT結果表明DHA可降低3T3-L1前脂肪細胞的活力。對3T3-L1前脂肪細胞周期的研究發(fā)現,DHA能誘導前脂肪細胞G2/M期阻滯,增強ERK1/2的活化、上調p21的表達。Hoechst染色顯示DHA可誘導3T3-L1前脂肪細胞凋亡,JC-1染色表明DHA可降低線粒體膜電位,蛋白免疫印跡分析發(fā)現DHA可上調凋亡相關蛋白p53表達、降低Bcl-2/Bax比值。同時發(fā)現DHA可增強前脂肪細胞凋亡效應因子Caspase 3的活性。對成熟脂肪細胞的研究發(fā)現,DHA可降低3T3-L1成熟脂肪細胞的活力、降低脂質含量,細胞周期與細胞凋亡檢測試劑盒Hoechst染色結果顯示DHA能誘導3T3-L1成熟脂肪細胞凋亡,JC-1染色表明DHA處理24h可降低成熟脂肪細胞的線粒體膜電位,蛋白免疫印跡分析發(fā)現DHA可降低Bcl-2/Bax比值、抑制成熟脂肪細胞抗凋亡蛋白Akt和ERK1/2的活化、抑制CREB表達,上調促凋亡蛋白Bad水平,還發(fā)現DHA可增強成熟脂肪細胞凋亡效應因子Caspase 3的活性。
結論DHA可激活ERK1/2/p21途徑誘導G2/M期阻滯,抑制3T3-L1前脂肪細胞增殖,并通過上調p53表達、降低Bcl-2/Bax比值、升高Caspase 3活性,誘導前脂肪細胞凋亡。DHA通過抑制Akt/CREB和ERK途徑、降低Bcl-2/Bax比值、上調促凋亡蛋白Bad水平、升高Caspase 3活性,誘導成熟脂肪細胞凋亡。
參考文獻
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