背景^[1-3]

SK-LMS-1人陰戶平滑肌肉瘤貼壁細(xì)胞系是一種用于研究人陰戶平滑肌肉瘤的細(xì)胞系。這種細(xì)胞系通常用于研究腫瘤的生物學(xué)特性、藥物篩選和化療藥物敏感性等方面的研究。

SK-LMS-1人陰戶平滑肌肉瘤貼壁細(xì)胞系具有一些獨(dú)特的生物學(xué)特性，例如上皮樣細(xì)胞形態(tài)、貼壁生長等。這種細(xì)胞系可以用于研究腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為，以及評估治療效果和開發(fā)新的治療策略。

SK-LMS-1人陰戶平滑肌肉瘤貼壁細(xì)胞系是一種來源于人類陰戶平滑肌肉瘤的貼壁細(xì)胞系。這種細(xì)胞系通常用于研究腫瘤的生物學(xué)特性、藥物篩選和治療等。

SK-LMS-1細(xì)胞系具有以下特點(diǎn)：

形態(tài)特征：細(xì)胞呈長梭形或多邊形，大小約為10-30微米。

生長特性：SK-LMS-1細(xì)胞系在適宜的培養(yǎng)條件下，生長迅速，增殖能力強(qiáng)。

表達(dá)特征：SK-LMS-1細(xì)胞系表達(dá)多種腫瘤相關(guān)基因和蛋白，如ER、PR、HER2等。

藥物敏感性：SK-LMS-1細(xì)胞系對多種抗腫瘤藥物敏感，如紫杉醇、順鉑、吉非替尼等。

SK-LMS-1細(xì)胞系廣泛應(yīng)用于陰戶平滑肌肉瘤研究，包括腫瘤的發(fā)病機(jī)制、診斷和治療等方面。同時(shí)，由于其易于培養(yǎng)和操作，也被廣泛應(yīng)用于基礎(chǔ)研究和藥物篩選等領(lǐng)域。

SK-LMS-1人陰戶平滑肌肉瘤貼壁細(xì)胞系

SK-LMS-1人陰戶平滑肌肉瘤貼壁細(xì)胞系細(xì)胞培養(yǎng)操作

1)復(fù)蘇SK-LMS-1人陰戶平滑肌肉瘤貼壁細(xì)胞系細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。

將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2)SK-LMS-1人陰戶平滑肌肉瘤貼壁細(xì)胞系細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細(xì)胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

c、按6-8 mL/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

d、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

3)SK-LMS-1人陰戶平滑肌肉瘤貼壁細(xì)胞系細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例；

a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。

c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

應(yīng)用^[4-5]

SK-LMS-1人陰戶平滑肌肉瘤貼壁細(xì)胞系可以用于平滑肌肉瘤中miR-506的表達(dá)及其生物學(xué)意義

探索miR-506與間葉上皮轉(zhuǎn)化(Mesenchymal to epithelial transition,MET)和DNA損傷同源重組修復(fù)信號通路之間的關(guān)系,為理解miR-506在平滑肌肉瘤中的具體生物學(xué)意義及發(fā)展?jié)撛诘闹委熎交∪饬龅氖侄翁峁┮罁?jù)。

方法：該項(xiàng)研究選取確診為平滑肌肉瘤的61例患者,然后在病案室查閱、收集他們病歷資料進(jìn)行整理分析,對后續(xù)的生存狀態(tài)進(jìn)行電話隨訪。61例患者中有37例具有新鮮標(biāo)本,37例具有新鮮標(biāo)本的患者中有12例患者同時(shí)具有相對應(yīng)的癌旁組織,我們通過應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,q RT-PCR)技術(shù)對這37例新鮮平滑肌肉瘤標(biāo)本和其中的12例患者的癌旁組織中miR-506表達(dá)量的高低進(jìn)行相對定量,并對miR-506在癌與癌旁組織的表達(dá)量進(jìn)行差異性對比分析。

從收集該到61例平滑肌肉瘤患者的腫瘤組織經(jīng)過專業(yè)人員的制作成組織芯片,應(yīng)用免疫組織化學(xué)SP染色的方法對芯片染色來檢測組織中MET相關(guān)指標(biāo)蛋白:上皮型鈣粘蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、神經(jīng)型鈣黏附蛋白(N-cadherin)、β-鏈蛋白(β-catenin)、Slug和DNA損傷同源重組修復(fù)相關(guān)指標(biāo)蛋白RAD51、RAD52、ATM、ATR的表達(dá)情況,然后進(jìn)行后續(xù)的相關(guān)性分析。采用卡方檢驗(yàn)分析法對miR-506的表達(dá)量、相關(guān)指標(biāo)蛋白以及患者的臨床病理特征之間進(jìn)行相關(guān)性分析。通過采用Kaplan-Meier分析法對miR-506表達(dá)量以及各相關(guān)指標(biāo)蛋白的表達(dá)情況對平滑肌肉瘤患者的總生存期及無進(jìn)展生存期的影響進(jìn)行分析。在SK-LMS-1人陰戶平滑肌肉瘤貼壁細(xì)胞系中上調(diào)或者抑制miR-506的表達(dá)后,用MTT實(shí)驗(yàn)、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)、劃痕實(shí)驗(yàn)(Wound Healing)、Transwell體外遷移侵襲實(shí)驗(yàn)來驗(yàn)證miR-506對SK-LMS-1人陰戶平滑肌肉瘤貼壁細(xì)胞系的增殖、遷移和侵襲性的作用;用Western blot方法來進(jìn)一步驗(yàn)證miR-506對MET相關(guān)蛋白(E-cadherin,β-catenin,N-cadherin,Vimentin和Slug)和DNA損傷修復(fù)同源重組修復(fù)相關(guān)蛋白(RAD51,RAD52,ATM,ATR)表達(dá)的影響;用MTT、Western blot等方法來檢測miR-506對平滑肌肉瘤細(xì)胞對順鉑和吡柔比星的藥物敏感性的影響及其機(jī)制。

結(jié)果1.q RT-PCR的結(jié)果顯示,平滑肌肉瘤新鮮標(biāo)本中miR-506的表達(dá)量與癌旁組織相比降低(n=12,P=0.026),同時(shí)按照miR-506中位表達(dá)量將患者分為miR-506高表達(dá)組跟miR-506低表達(dá)組,miR-506高表達(dá)組患者的總生存優(yōu)于miR-506低表達(dá)組的患者(OS:n=37,P=0.038)。這提示miR-506的表達(dá)有助于提高平滑肌肉瘤患者的預(yù)后。

參考文獻(xiàn)

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[3]Somatic Leiomyosarcoma of the Soft Tissues:A Single-Institutional Analysis of Factors Predictive of Survival in 164 Patients.Kamran Harati;;Adrien Daigeler;;Kim Lange;;Hiltrud Niggemann;;Ingo Stricker;;Hans-Ulrich Steinau;;Marcus Lehnhardt;;Ole Goertz.World Journal of Surgery,2017

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[5]李鋒.平滑肌肉瘤中miR-506的表達(dá)及其生物學(xué)意義[D].天津醫(yī)科大學(xué),2019.