背景^[1-3]

小鼠胃平滑肌細(xì)胞是一種用于研究胃部疾病的細(xì)胞模型。通過使用小鼠胃平滑肌細(xì)胞，科學(xué)家們可以研究胃部疾病的病因、病理生理過程以及藥物的作用機制。

小鼠胃平滑肌細(xì)胞具有與人體相似的生理功能和基因表達(dá)模式，因此被廣泛用于藥物篩選和疾病模型的研究。這些細(xì)胞可以用于研究胃潰瘍、胃炎、胃癌等疾病的發(fā)病機制和藥物治療效果。

此外，小鼠胃平滑肌細(xì)胞還可以用于研究胃腸激素的作用機制和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。這些激素在調(diào)節(jié)消化、吸收、代謝等方面發(fā)揮著重要作用，因此對這些激素的研究有助于深入了解胃腸功能和疾病的發(fā)生機制。

小鼠胃平滑肌細(xì)胞

小鼠胃平滑肌細(xì)胞(mouse gastric smooth muscle cells)是存在于小鼠胃部的平滑肌細(xì)胞，主要負(fù)責(zé)胃的收縮和運動，以幫助消化食物。這些細(xì)胞具有以下幾個主要特點：

形態(tài)特征：小鼠胃平滑肌細(xì)胞呈長條形或梭形，有多個分支狀突起，細(xì)胞核位于中央。

生理功能：小鼠胃平滑肌細(xì)胞具有自主收縮和節(jié)律性收縮的能力，能夠控制胃的蠕動和排空，從而幫助消化食物。

與疾病相關(guān)：小鼠胃平滑肌細(xì)胞的異常增殖或功能障礙可能與一些胃腸道疾病相關(guān)，如胃潰瘍、胃癌等。

研究應(yīng)用：小鼠胃平滑肌細(xì)胞可用于研究胃腸道疾病的發(fā)病機制、藥物篩選和治療等方面。例如，通過基因敲除或過表達(dá)技術(shù)，可以研究特定基因?qū)π∈笪钙交〖?xì)胞功能的影響。

小鼠胃平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)操作

1)復(fù)蘇小鼠胃平滑肌細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。

將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2)小鼠胃平滑肌細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細(xì)胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

c、按6-8 mL/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

d、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

3)小鼠胃平滑肌細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例；

a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細(xì)胞計數(shù)。

b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。

c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

應(yīng)用^[4-5]

小鼠胃平滑肌細(xì)胞可以用于柴胡疏肝散對功能性消化不良小鼠胃平滑肌細(xì)胞凋亡和NF-κB蛋白表達(dá)的影響

探討柴胡疏肝散對功能性消化不良(functional dyspepsia,FD)小鼠胃平滑肌細(xì)胞凋亡和NF-κB蛋白表達(dá)的影響,以進一步揭示疏肝理氣法促胃動力機制。

方法:將48只健康SD小鼠隨機分為正常組、模型組、多潘立酮組及柴胡疏肝散低、中、高劑量組。除正常組外,其余五組均通過改良夾尾激惹刺激法制造FD大鼠模型,于造模同一天分別使用多潘立酮水溶液(0.3g·L-1)和柴胡疏肝散低、中、高劑量水煎劑(0.16g?mL-1,0.32g?mL-1,0.64g?mL-1)進行灌胃,在造模4周后,測定各組小鼠胃排空率,采用HE染色觀察胃組織病理變化,利用透射電子顯微鏡觀察大鼠胃平滑肌細(xì)胞(smooth muscle cell,SMC)線粒體形態(tài),采用原位末端缺口標(biāo)記法(TdT-mediated d UTP Nick-End Labeling,TUNEL)檢測小鼠胃SMC凋亡情況;免疫組化法檢測小鼠胃平滑肌細(xì)胞Bcl-2、Bax、NF-KB蛋白的表達(dá)。結(jié)果:各組大鼠胃組織病理學(xué)觀察未見糜爛、潰瘍、化生等器質(zhì)性病變。

透射電鏡觀察胃組織發(fā)現(xiàn)正常組小鼠胃SMC之間間隙正常,連接緊密,線粒體形態(tài)正常;模型組小鼠胃SMC間隙增寬,連接松弛,線粒體明顯腫脹,亦可見凋亡小體;多潘立酮組和柴胡疏肝散低、中、高劑量組胃SMC間隙正常,連接緊密,線粒體腫脹減輕,凋亡小體減少。與正常組比較,模型組大鼠胃排空率顯著降低(P<0.05),細(xì)胞凋亡率顯著增高(P<0.05),小鼠胃平滑肌細(xì)胞Bcl-2表達(dá)顯著減少(P<0.05),Bax、NF-KB表達(dá)顯著升高(P<0.05);與模型組比較,柴胡疏肝散低、中、高劑量組和多潘立酮組大鼠胃排空率均顯著升高(均P<0.05),胃SMC線粒體損傷顯著改善,細(xì)胞凋亡率和Bax、NF-KB表達(dá)水平均顯著降低(均P<0.05),Bcl-2表達(dá)水平則顯著升高(P<0.05);與多潘立酮組比較,柴胡疏肝散高劑量組胃排空率顯著升高(P<0.05),胃SMC凋亡率和Bax、NF-KB表達(dá)水平均顯著降低(均P<0.05),Bcl-2表達(dá)水平則顯著升高(P<0.05);柴胡疏肝散低、中、高劑量組間比較,中、高劑量組胃排空率和Bcl-2表達(dá)水平較低劑量組有顯著升高(均P<0.05),中、高劑量組胃SMC凋亡率、Bax、NF-KB表達(dá)水平較低劑量組顯著降低(均P<0.05)。

結(jié)論:1.柴胡疏肝散可以降小鼠胃平滑肌細(xì)胞的凋亡率,從而發(fā)揮促胃動力作用,其機制是通過上調(diào)Bcl-2的表達(dá)、抑制Bax的表達(dá)來調(diào)節(jié)線粒體途徑的細(xì)胞凋亡來發(fā)揮作用。

2.FD的發(fā)生、發(fā)展可能與胃平滑肌NF-κB蛋白的表達(dá)密切相關(guān);柴胡疏肝散可以減少NF-κB蛋白的表達(dá),抑制NF-κB凋亡信號通路異常激活導(dǎo)致的胃平滑肌的損傷,促進胃腸動力的恢復(fù)。

參考文獻

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