背景[1-7]
DNA pulldown試劑盒利用預先使用BSA、寡核苷酸隨機引物封閉磁珠，降低了磁珠與蛋白、基因組DNA的非特異性結合。DNA pulldown技術是一種用于研究DNA與蛋白質互作的技術，通常用來分析目標基因調控區(qū)域相結合的轉錄因子及其他調控蛋白。針對目標區(qū)域設計脫硫生物素標記的特異性DNA探針，并與細胞核提取物孵育。
通過偶聯磁珠，經洗脫，得到目的DNA探針-蛋白質復合物。最后采用Western Blot或質譜鑒定蛋白質類型。隨著功能基因組學的興起，蛋白質-DNA相互作用的研究變得越來越重要。蛋白質-DNA相互作用涉及很多生物學功能，如基因調節(jié)、DNA修復和DNA重組現有研究DNA-蛋白相互作用的技術方案有多種，如酵母單雜交(Y1H)方法、ChIP-seq方法、凝膠遷移實驗(EMSA)和DNA pulldown方法。
DNA pulldown方法是一種非常重要的蛋白質-DNA相互作用的研究方法。該方法可以在同一個樣品中分離DNA-蛋白復合體。通常，是通過高親和性的標簽(如生物素)標記DNA，標簽的目的是固定DNA，通過瓊脂糖珠子或磁珠可以分離出生物素化的DNA，從而分離出細胞裂解液中的DNA-蛋白復合體。分離出的蛋白進行洗脫后可以通過Western Blot進行檢測，或通過質譜進行篩選。
步驟：
1、磁珠預處理：使用BSA(牛血清白蛋白)和寡核苷酸隨機引物封閉鏈霉親和素標記的磁珠；
2、制備探針?磁珠復合物；
3、提取并預處理細胞核蛋白：向提取核蛋白樣品中加入脫氧核糖核酸酶孵育，再加入磁珠孵育，去除磁珠，收集上清；
4、pulldown；
5、蛋白樣品的收集。
產品特點：
1.快速省時：從標記探針到結果分析，全部實驗只需3小時。
2.穩(wěn)定可靠：DNA末端標記生物素，不影響蛋白結合位點。標記好的DNA可以保存一年。
3.配備完整：該試劑盒包括對照系統(tǒng)，只需要自備生物素末端標記的DNA探針及核蛋白質樣品。
4.可得到完整、高濃度蛋白，用于質譜檢測。
應用[8]
DNA pulldown試劑盒可用于基于熒光信號放大技術的蛋白質和核酸檢測方法研究：
利用信號雙重擴增(DNA擴增、SYBR Green I/BT-DNA結合物熒光信號擴增)結合磁分離技術,利用落射熒光顯微術建立了一種超靈敏的靶蛋白熒光免疫測定方法。在高濃度時,熒光強度與靶抗原在5.0×10-13～8.0×10-15mol L-1的濃度對數范圍內呈良好的線性關系。在低濃度時,一個功能化得磁納米球對應一個蛋白分子,這時通過計數單個磁納米球定量檢測單個生物分子。
磁納米球的數目和抗體的濃度在8.0×10-14～3.0×10-15mol L-1的范圍內呈良好的線性關系。這個實驗設計了一種啞鈴型的RCA模版、將卟啉衍生物(NMM)與RCA的產物(雙向G-四倍體DNA)相互作用,發(fā)展了一種快速、簡便、高靈敏的基于啞鈴型探針誘導RCA擴增輔助的G-四倍體免標記熒光信號放大策略超靈敏檢測DNA。
參考文獻
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